JP0062
Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit
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的Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B ELISA Kit (Mouse BAFF/BLyS/TNFSF13B Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠B細(xì)胞刺激因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的BAFF/BLyS/TNFSF13B的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為58pg/ml，與小鼠APRIL、BAFF R/Fc Chimera、人BAFF沒有交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
B細(xì)胞活化因子(B-cell activating factor, BAFF)，又稱BLyS, TALL-1, THANK和TNFSF13B，是TNF家族成員之一，其具有維持B細(xì)胞存活和成熟的功能。小鼠BAFF是一種分子量為32kDa的II型跨膜蛋白，在血液中存在18kDa的游離型BAFF。小鼠BAFF的N端TNF同源區(qū)包含有一個(gè)furin酶切位點(diǎn)(RNRR)，經(jīng)酶切作用后即可得到游離型BAFF。多種類型的細(xì)胞和組織均能夠產(chǎn)生BAFF，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、脾臟、淋巴結(jié)和骨髓等。通常BAFF被認(rèn)為以同型三聚體的形式存在，但有時(shí)也會(huì)與另一種TNFSF成員APRIL組成雜聚體。
BAFF至少具有3種受體：B細(xì)胞成熟抗原(BCMA/TNFRSF17)、跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配基相互作用因子(TACI/TNFRSF13B)和BAFF受體(BAFF R/BR3/TNFRSF13C)，三者都屬于TNF受體家族。其中TACI和BCMA不僅能夠識(shí)別BAFF，也能夠與APRIL相互作用，BAFF R僅能特異性與BAFF結(jié)合。三種受體均主要表達(dá)在B細(xì)胞表面。BAFF與受體結(jié)合，主要調(diào)控B細(xì)胞的存活和成熟。BAFF敲除的小鼠會(huì)出現(xiàn)淋巴結(jié)和脾臟中濾泡和邊緣B細(xì)胞的減少，但是骨髓細(xì)胞和腹膜的B1細(xì)胞將不受影響。BAFF的過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致小鼠脾臟和淋巴結(jié)中B細(xì)胞數(shù)量升高，并且小鼠會(huì)表現(xiàn)出明顯的自身免疫疾病相關(guān)特征，例如自身抗體水平升高、腎臟中免疫球蛋白減少和腎小球性腎炎及伴隨的腎功能衰竭。結(jié)合相關(guān)臨床數(shù)據(jù)，研究人員認(rèn)為BAFF有可能能夠成為自身免疫性疾病治療的新靶點(diǎn)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B的濃度，其原理見圖1。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體后，生物素化抗小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體與小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝

JP0062-1
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B抗體預(yù)包被板
8孔×12條

JP0062-2
樣品分析緩沖液
5ml

JP0062-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml

JP0062-4
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

JP0062-5
小鼠BAFF/BLyS/TNFSF13B生物素化抗體
10ml

JP0062-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml

JP0062-7
洗滌液(20X)
30ml

JP0062-8
TMB溶液
10ml

JP0062-9
終止液
5ml

JP0062-10
封板膜(透明)
2張

JP0062-11
封板膜(白色)
2張

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說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。