JJP109S
BeyoClick? HPG-594蛋白合成檢測試劑盒
50-500次

1568

JJP109L
BeyoClick? HPG-594蛋白合成檢測試劑盒
200-2000次

4698

研發(fā)生產(chǎn)的BeyoClick? HPG-594蛋白合成檢測試劑盒(BeyoClick? HPG Protein Synthesis Kit with Alexa Fluor 594)，也稱BeyoClick? HPG-594新生蛋白質(zhì)檢測試劑盒(BeyoClick? HPG-594 Nascent Protein Assay Kit)，是一種基于蛋白合成過程中蛋氨酸(Methionine)類似物HPG (L-homopropargylglycine)的摻入，并通過隨后的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)使HPG被Alexa Fluor 594所標(biāo)記，從而實現(xiàn)簡單、快速、高靈敏地檢測新合成蛋白的試劑盒。
本試劑盒可以原位檢測培養(yǎng)的活細(xì)胞中新生蛋白質(zhì)的合成[1-2]，并可以定量檢測新生蛋白質(zhì)的合成。該檢測過程不需要放射性同位素(如35S-methionine)和抗體，只需要簡單的兩步反應(yīng)即可完成。新生蛋白質(zhì)又稱新生蛋白、新生成蛋白質(zhì)、初生蛋白質(zhì)或新合成蛋白。
經(jīng)本試劑盒處理后，有新合成蛋白的細(xì)胞在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)非常明亮的紅色熒光，可以用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀等檢測，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-content screening, HCS)。
HPG (L-homopropargylglycine)，中文名為L-高炔丙基甘氨酸，是一種蛋氨酸(Methionine)即甲硫氨酸的類似物，HPG可以在蛋白合成過程中替代蛋氨酸摻入到新合成的蛋白中。另一方面，HPG上的炔基能與熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速高效，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的蛋白會被相應(yīng)的熒光探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臒晒鈾z測設(shè)備檢測到新合成蛋白。

圖1.BeyoClick?系列蛋白合成檢測試劑盒中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)原理圖。熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(Labeled Azide)與摻入到細(xì)胞蛋白中的HPG，在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，最終使細(xì)胞蛋白標(biāo)記上熒光探針或其它探針。
本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點(diǎn)擊反應(yīng)，無需特殊溫度，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記摻入到新合成蛋白質(zhì)的HPG，并且可以檢測到單個細(xì)胞的蛋白合成情況，同時也能進(jìn)行蛋白合成的總體定量檢測。
本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，不會影響細(xì)胞形態(tài)，不會產(chǎn)生多余的附加產(chǎn)物，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細(xì)胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測細(xì)胞核等)。
本試劑盒檢測快速。本試劑盒檢測新合成的蛋白僅需1.5-2小時。本試劑盒操作流程請參考圖2。

圖2.BeyoClick?系列蛋白合成檢測試劑盒實驗操作流程圖。
本試劑盒同時提供了染色細(xì)胞核的Hoechst 33342，以方便染色觀察所有的細(xì)胞核。HeLa細(xì)胞用本試劑盒檢測新合成蛋白的效果參見圖3和圖4。

圖3.BeyoClick? HPG-594蛋白合成檢測試劑盒(JJP109)用熒光顯微鏡檢測HeLa細(xì)胞新合成蛋白的效果圖。HPG孵育0.5小時后檢測，無HPG組觀察不到紅色熒光(最左側(cè)一列)；HPG組有明亮的紅色熒光(中間一列)；而用蛋白合成抑制劑茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前預(yù)處理0.5小時后，紅色熒光顯著減弱，說明蛋白合成抑制后，HPG的摻入被顯著抑制(最右側(cè)一列)。實際檢測效果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。

圖4.BeyoClick? HPG-594蛋白合成檢測試劑盒(JJP109)檢測HeLa細(xì)胞新合成蛋白的熒光酶標(biāo)儀檢測結(jié)果。無抑制劑組(Vehicle)熒光信號較強(qiáng)；用蛋白合成抑制劑茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前預(yù)處理組熒光信號較弱。實際檢測效果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
本試劑盒小包裝如果用于6孔板培養(yǎng)細(xì)胞的檢測，可以檢測50個樣品，每個樣品的反應(yīng)體系為500μl的Click反應(yīng)液；如果用于96孔板檢測，可以檢測500個樣品，每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應(yīng)液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測，分別可以檢測125、250、350和1250個樣品，每個樣品推薦的Click反應(yīng)液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJP109S-1
HPG (100X)
1.1ml

JJP109S-2
Azide 594
55μl

JJP109S-3
Click Reaction Buffer
30ml

JJP109S-4
CuSO4
1.1ml

JJP109S-5
Click Additive
2管

JJP109S-6
Hoechst 33342 (1000X)
50μl

—
說明書
1份

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJP109L-1
HPG (100X)
4.4ml

JJP109L-2
Azide 594
220μl

JJP109L-3
Click Reaction Buffer
120ml

JJP109L-4
CuSO4
4.4ml

JJP109L-5
Click Additive
1瓶

JJP109L-6
Hoechst 33342 (1000X)
200μl

—
說明書
1份

保存條件：
-20oC保存，一年有效。Azide 594和Hoechst 33342須避光保存。
注意事項：
Click Additive配制成溶液后請注意適當(dāng)分裝凍存。如果溶解后有白色物質(zhì)析出，請上下顛倒多次，待全部溶解后使用。如果該溶液顏色變成棕色，說明該組分的有效成分已失效，請棄用。
如果需要使用茴香霉素(Anisomycin)作為對照，可以從訂購Anisomycin (JNK激活劑) (SJP132)。
如果需要更多HPG，可以從訂購L-Homopropargylglycine (HPG) (≥98%, BioReagent) (JJP20057)。
含蛋氨酸培養(yǎng)液和血清因為含正常蛋氨酸，所以會競爭性影響HPG的摻入，進(jìn)而影響熒光的強(qiáng)度，推薦使用DMEM高糖培養(yǎng)液(無蛋氨酸) (JJP81)或RPMI 1640培養(yǎng)液(無蛋氨酸) (JJP83)。
由于動物體內(nèi)無法去除內(nèi)源蛋氨酸，所以本試劑盒不建議用于動物組織切片樣品的檢測。
由于本產(chǎn)品需要銅離子催化進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)，請注意如下的兼容性問題及解決方案。本產(chǎn)品完全兼容有機(jī)類染料如Alexa Fluor?系列普通染料及Fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料；對于Qdot?納米晶體探針、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor? 680-R-PE等，需要在點(diǎn)擊反應(yīng)完成后進(jìn)行反應(yīng)和檢測；本產(chǎn)品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，對于熒光類蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、TC-FlAsH?和TC-ReAsH?類試劑，需要在點(diǎn)擊反應(yīng)前進(jìn)行反應(yīng)和檢測。由于Phalloidin (鬼筆環(huán)肽)不兼容點(diǎn)擊反應(yīng)，推薦使用Tubulin-Tracker Red (抗體法微管紅色熒光探針) (C1050)進(jìn)行細(xì)胞微管的檢測。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

JJP106S
BeyoClick? HPG-555蛋白合成檢測試劑盒
50-500次

1568

研發(fā)生產(chǎn)的BeyoClick? HPG-555蛋白合成檢測試劑盒(BeyoClick? HPG Protein Synthesis Kit with Alexa Fluor 555)，也稱BeyoClick? HPG-555新生蛋白質(zhì)檢測試劑盒(BeyoClick? HPG-555 Nascent Protein Assay Kit)，是一種基于蛋白合成過程中蛋氨酸(Methionine)類似物HPG (L-homopropargylglycine)的摻入，并通過隨后的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)使HPG被Alexa Fluor 555所標(biāo)記，從而實現(xiàn)簡單、快速、高靈敏地檢測新合成蛋白的試劑盒。
本試劑盒可以原位檢測培養(yǎng)的活細(xì)胞中新生蛋白質(zhì)的合成[1-2]，并可以定量檢測新生蛋白質(zhì)的合成。該檢測過程不需要放射性同位素(如35S-methionine)和抗體，只需要簡單的兩步反應(yīng)即可完成。新生蛋白質(zhì)又稱新生蛋白、新生成蛋白質(zhì)、初生蛋白質(zhì)或新合成蛋白。
經(jīng)本試劑盒處理后，有新合成蛋白的細(xì)胞在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)非常明亮的紅色熒光，可以用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀等檢測，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-content screening, HCS)。
HPG (L-homopropargylglycine)，中文名為L-高炔丙基甘氨酸，是一種蛋氨酸(Methionine)即甲硫氨酸的類似物，HPG可以在蛋白合成過程中替代蛋氨酸摻入到新合成的蛋白中。另一方面，HPG上的炔基能與熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555、Azide Alexa Fluor 594、Azide Alexa Fluor 647等)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速高效，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的蛋白會被相應(yīng)的熒光探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臒晒鈾z測設(shè)備檢測到新合成蛋白。

圖1.BeyoClick?系列蛋白合成檢測試劑盒中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)原理圖。熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(Labeled Azide)與摻入到細(xì)胞蛋白中的HPG，在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，最終使細(xì)胞蛋白標(biāo)記上熒光探針或其它探針。
本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點(diǎn)擊反應(yīng)，無需特殊溫度，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記摻入到新合成蛋白質(zhì)的HPG，并且可以檢測到單個細(xì)胞的蛋白合成情況，同時也能進(jìn)行蛋白合成的總體定量檢測。
本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，不會影響細(xì)胞形態(tài)，不會產(chǎn)生多余的附加產(chǎn)物，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細(xì)胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測細(xì)胞核等)。
試劑盒檢測快速。本試劑盒檢測新合成的蛋白僅需1.5-2小時。本試劑盒操作流程請參考圖2。

圖2.BeyoClick?系列蛋白合成檢測試劑盒實驗操作流程圖。
本試劑盒同時提供了染色細(xì)胞核的Hoechst 33342，以方便染色觀察所有的細(xì)胞核。HeLa細(xì)胞用本試劑盒檢測新合成蛋白的效果參見圖3和圖4。

圖3.BeyoClick? HPG-555蛋白合成檢測試劑盒(JJP106)用熒光顯微鏡檢測HeLa細(xì)胞新合成蛋白的效果圖。HPG孵育0.5小時后檢測，無HPG組觀察不到紅色熒光(最左側(cè)一列)；HPG組有明亮的紅色熒光(中間一列)；而用蛋白合成抑制劑茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前預(yù)處理0.5小時后，紅色熒光顯著減弱，說明蛋白合成抑制后，HPG的摻入被顯著抑制(最右側(cè)一列)。實際檢測效果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。

圖4.BeyoClick? HPG-555蛋白合成檢測試劑盒(JJP106)檢測HeLa細(xì)胞新合成蛋白的熒光酶標(biāo)儀檢測結(jié)果。無抑制劑組(Vehicle)熒光信號較強(qiáng)；用蛋白合成抑制劑茴香霉素(Ansiomycin) (50μM)提前預(yù)處理組熒光信號較弱。實際檢測效果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
本試劑盒小包裝如果用于6孔板培養(yǎng)細(xì)胞的檢測，可以檢測50個樣品，每個樣品的反應(yīng)體系為500μl的Click反應(yīng)液；如果用于96孔板檢測，可以檢測500個樣品，每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應(yīng)液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測，分別可以檢測125、250、350和1250個樣品，每個樣品推薦的Click反應(yīng)液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJP106S-1
HPG (100X)
1.1ml

JJP106S-2
Azide 555
55μl

JJP106S-3
Click Reaction Buffer
30ml

JJP106S-4
CuSO4
1.1ml

JJP106S-5
Click Additive
2管

JJP106S-6
Hoechst 33342 (1000X)
50μl

—
說明書
1份

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJP106L-1
HPG (100X)
4.4ml

JJP106L-2
Azide 555
220μl

JJP106L-3
Click Reaction Buffer
120ml

JJP106L-4
CuSO4
4.4ml

JJP106L-5
Click Additive
1瓶

JJP106L-6
Hoechst 33342 (1000X)
200μl

—
說明書
1份

保存條件：
-20oC保存，一年有效。Azide 555和Hoechst 33342須避光保存。
注意事項：
Click Additive配制成溶液后請注意適當(dāng)分裝凍存。如果溶解后有白色物質(zhì)析出，請上下顛倒多次，待全部溶解后使用。如果該溶液顏色變成棕色，說明該組分的有效成分已失效，請棄用。
如果需要使用茴香霉素(Anisomycin)作為對照，可以從訂購Anisomycin (JNK激活劑) (SJP132)。
如果需要更多HPG，可以從訂購L-Homopropargylglycine (HPG) (≥98%, BioReagent) (JJP20057)。
含蛋氨酸培養(yǎng)液和血清因為含正常蛋氨酸，所以會競爭性影響HPG的摻入，進(jìn)而影響熒光的強(qiáng)度，推薦使用DMEM高糖培養(yǎng)液(無蛋氨酸) (JJP81)或RPMI 1640培養(yǎng)液(無蛋氨酸) (JJP83)。
由于動物體內(nèi)無法去除內(nèi)源蛋氨酸，所以本試劑盒不建議用于動物組織切片樣品的檢測。
由于本產(chǎn)品需要銅離子催化進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)，請注意如下的兼容性問題及解決方案。本產(chǎn)品完全兼容有機(jī)類染料如Alexa Fluor?系列普通染料及Fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料；對于Qdot?納米晶體探針、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor? 680-R-PE等，需要在點(diǎn)擊反應(yīng)完成后進(jìn)行反應(yīng)和檢測；本產(chǎn)品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，對于熒光類蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、TC-FlAsH?和TC-ReAsH?類試劑，需要在點(diǎn)擊反應(yīng)前進(jìn)行反應(yīng)和檢測。由于Phalloidin (鬼筆環(huán)肽)不兼容點(diǎn)擊反應(yīng)，推薦使用Tubulin-Tracker Red (抗體法微管紅色熒光探針) (C1050)進(jìn)行細(xì)胞微管的檢測。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。