含Capping結(jié)構(gòu)的高活性mRNA

CleanCap^? mRNA

TriLink BioTechnologies開發(fā)的CleanCap^? mRNA是一種包被了特定蛋白的加帽mRNA。

本系列產(chǎn)品有Cas9、Cre、EGFP、Luciferase、mCherry、β-gal、EPO、OVA（ovalbumin）可供選擇。

TriLink公司的CleanCap^? mRNA能夠作為高活性的mRNA使用，通過Capping（加帽）避免生物體內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答，改善in vivo條件下的翻譯效率。

◆CleanCap^? 是什么？：為mRNA添加Cap 1 結(jié)構(gòu)

TriLink公司的CleanCap^? mRNA可以通過在mRNA上添加Capping結(jié)構(gòu)（Cap 1）來避免生物體內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答，從而合成具有高翻譯效率的mRNA。

◆TriLink公司的CleanCap^? mRNA特點(diǎn)

1.　加帽效率高達(dá)94%+，可獲得更高活性的mRNA。

2.　不會激活模式識別受體，可避免免疫應(yīng)答

3.　相較于Cap 0結(jié)構(gòu)（ARCA法加帽），in vivo條件下的翻譯效率得到了大幅改善

4.　相較于酶加帽法，所需成本大幅降低

5.　加帽修飾mRNA產(chǎn)品系列豐富

◆CleanCap^?和ARCA(Anti-reverse capping analog)法的比較

將從以下兩點(diǎn)比較ARCA法和CleanCap^?加帽的mRNA。

●　加帽效率

●　細(xì)胞內(nèi)蛋白的表達(dá)量

加帽效率的比較

分別使用CleanCap^?和ARCA加帽表達(dá)Fluc的mRNA，比較兩者的加帽效率。

結(jié)果顯示，使用CleanCap^? 獲得的加帽效率比ARCA法高。

CleanCap?	ARCA
90-99%	60-80%

細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平的比較

分別使用CleanCap^?和ARCA法加帽表達(dá)EGFP的mRNA后，使其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，并通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。

比較以下5種細(xì)胞：CHO cells、Foreskin fibroblast cells、iPS derived cardiomyoctyes、Jurkat、MCF 10A

結(jié)果顯示，無論在哪一種細(xì)胞中，使用CleanCap^?加帽的EGFP mRNA的蛋白表達(dá)水平都更高。

	ARCA EGFP mRNA	CleanCap? EGFP mRNA
CHO Cells    6 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    72 h post fusion
Foreskin fibroblast cells,    10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    24 h post fusion
iPS derived cardiomyoctyes,    10 minute fusion Fuse-It-mRNA Kit    1μg mRNA    24 h post fusion
Data courtesy of Beniag

	ARCA EGFP mRNA	CleanCap? EGFP mRNA
Jurkat: 500ng    mRNA + 1μL    jetMESSENGER
MCF 10A: 500ng    mRNA + 1μL    jetMESSENGER
Data courtesy of Polyplus-transfection

CleanCap^?與酶加帽法的制備成本比較

計(jì)算4 mL（2 mg）和1 mL（400 μg）兩種規(guī)格制備加帽mRNA時所需的成本。

結(jié)果顯示，CleanCap^?與酶加帽法相比，生產(chǎn)成本更低。

◆與修飾mRNA的組合：置換尿苷

為使mRNA能夠高效表達(dá)，需最大限度地去除mRNA序列中的Uridine（尿苷），并將殘留的Uridine置換為Pseudo Uridine（PseudoU，假尿苷）或5-methoxy Uridine(5moU，5-甲氧基尿苷)。

TriLink公司可提供多種CleanCap^?與Pseudo Uridine、5-methoxy Uridine組合的mRNA產(chǎn)品。

Thp-1 Dual Cells (InvivoGen)

準(zhǔn)備2種表達(dá)Fluc的mRNA，正常序列（Standard Fluc）與盡可能去除尿苷的序列（U depleted Fluc），比較兩者的表達(dá)水平。

此外，在沒有進(jìn)行尿苷置換（wt）、置換為Pseudo Uridine（PseudoU）和置換為5-methoxy Uridine（5moU）的條件下進(jìn)行比較。

結(jié)果顯示，在U depleted Fluc（盡可能去除尿苷的序列）和置換為5-methoxy Uridine（5moU：甲氧基尿苷）的序列中，F(xiàn)luc的表達(dá)水平更高。

◆RNA定制合成服務(wù)

TriLink公司可提供RNA定制合成服務(wù)：化學(xué)合成短鏈RNA服務(wù)、轉(zhuǎn)錄合成長鏈RNA。定制項(xiàng)目包含加帽、修飾堿基、緩沖液組成、純化方法開發(fā)等。從使用修飾堿基的向?qū)NA合成到大規(guī)模mRNA合成服務(wù)均可提供，可滿足客戶廣泛的需求。

mRNA定制合成（in vitro轉(zhuǎn)錄合成）的服務(wù)內(nèi)容

目標(biāo)回收量：1 mg~

修飾堿基：Pseudouridine, 5-Methoxyuridine, 5-Methylcytidine/Pseudouridine等

加帽試劑：CleanCap^?

定制示例

●　只需ORF序列的mRNA合成

●　UTR序列和ORF序列的mRNA合成

歡迎與我們聯(lián)系，進(jìn)一步了解定制服務(wù)。

◆關(guān)于TriLink BioTechnologies

TriLink BioTechnologies是一家位于美國圣地亞哥的試劑、藥物生產(chǎn)定制公司，專注于核酸、寡核苷酸、加帽類似物的生產(chǎn)和長鏈RNA合成。

CleanCap^? mRNA是TriLink研發(fā)的新型共轉(zhuǎn)錄加帽法，與常規(guī)加帽法相比，可實(shí)現(xiàn)高加帽效率和高蛋白表達(dá)效率。

TriLink生產(chǎn)符合ICH Q7以及ISO 9001:2015。

◆產(chǎn)品列表

Cas9 mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
550-33824	CleanCap Cas9 mRNA	1 mg
552-33823		100 μg
558-33744	CleanCap Cas9 mRNA (5moU)	1 mg
550-33743		100 μg
555-33754	CleanCap Cas9 Nickase mRNA (5moU)	1 mg
551-33751		20 μg
557-33753		100 μg

Cas9 mRNA是在Broad、MIT、Harvard、Iowa、UTokyo以及Rockefeller授予的限制性許可下提供的產(chǎn)品。

Cre mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
555-33793	CleanCap Cre mRNA (5moU)	1 mg
559-33791		100 μg

EGFP mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
555-33793	CleanCap EGFP mRNA	1 mg
559-33791		100 μg
552-33703	CleanCap EGFP mRNA (5moU)	1 mg
556-33701		100 μg

mCherry mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
556-33723	CleanCap mCherry mRNA (5moU)	1 mg
550-33721		100 μg

Luciferase mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
555-33813	CleanCap FLuc mRNA	1 mg
559-33811		100 μg
559-33713	CleanCap FLuc mRNA (5moU)	1 mg
553-33711		100 μg
553-33733	CleanCap Renilla mRNA (5moU)	1 mg
557-33731		100 μg

β-gal mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
559-33833	CleanCap beta gal mRNA	1 mg
553-33831		100 μg
554-33763	CleanCap beta gal mRNA (5moU)	1 mg
558-33761		100 μg

EPO mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
559-33774	CleanCap EPO mRNA (5moU)	1 mg
551-33773		100 μg

OVA mRNA

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
558-35503	CleanCap Ova mRNA	1 mg
552-35501		100 μg
558-33783	CleanCap Ova mRNA (5moU)	1 mg
552-33781		100 μg

◆相關(guān)產(chǎn)品

加帽試劑

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
559-35511	CleanCap Reagent AG	1 μmol
553-35514		5 μmol
555-35513		10 μmol
553-35531	CleanCap Reagent (3' OMe) AG	1 μmol
557-35534		5 μmol
559-35533		10 μmol

※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。