PG357
Human/Mouse/Rat Glucagon ELISA Kit
96次

4598

的Human/Mouse/Rat Glucagon ELISA Kit (Human/Mouse/Rat Glucagon Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠胰高血糖素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人、小鼠和大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Glucagon的ELISA試劑盒。本試劑盒適用于小鼠、大鼠和人等多種哺乳動物Glucagon的檢測。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為20.8pg/ml，與人BDNF、β-NGF、NT-3
、NT-4、CNTF等均沒有交叉反應，與大鼠胰高血糖素有35%的交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
胰高血糖素(Glucagon)是由胰腺產(chǎn)生的具有29個氨基酸的多肽，在葡萄糖代謝和維持血糖平衡過程中具有重要作用。胰高血糖素前體mRNA主要表達在胰島α細胞、小腸L細胞和大腦內(nèi)。胰島α細胞表達激素原轉化酶PC2，又稱PCSK2，這是產(chǎn)生胰高血糖素所必須的酶。而在小腸L細胞中則表達激素原轉化酶PC1，該酶能夠加工前體胰高血糖素產(chǎn)生腸高血糖素和胃泌酸調(diào)節(jié)素。L細胞還能產(chǎn)生兩種胰高血糖素樣多肽，GLP-1和GLP-2，它們同樣來源于胰高血糖素前體，并且同樣能夠影響葡萄糖代謝，但是與胰高血糖素不具有任何序列相似性。胰高血糖素在不同物種間具有高度保守性，在人、小鼠、大鼠、豬、狗、馬等多種物種中均具有一致的氨基酸序列。
在正常的代謝過程中，胰高血糖素的分泌受到體內(nèi)血糖水平影響，當血糖濃度過低時，胰高血糖素分泌會增加；而當出現(xiàn)血糖濃度升高時，胰高血糖素的分泌則會減少。盡管胰高血糖素的結合位點在肝臟、腦、胰腺、腎、小腸和脂肪組織中均有表達，但其發(fā)揮活性主要還是在肝臟中。胰高血糖素能夠刺激糖原異生和肝糖原分解，從而增加血糖水平。胰高血糖素的分泌受到激素和神經(jīng)傳導物質的調(diào)控，游離葡萄糖濃度也能影響其分泌。胰島素在一定程度上能夠降低胰高血糖素的分泌，GABA和GLP-1也能減少胰高血糖素的分泌，然而一些L-谷氨酸、精氨酸和胰高血糖素本身則能夠增加其分泌。
與胰島素相同，在II型糖尿病患者中胰高血糖素的表達也會出現(xiàn)異常，并且會加重病情。在游離葡萄糖處于較高濃度時，胰島素對胰高血糖素分泌的抑制作用減弱，從而引起胰高血糖素血癥，增加了高血糖癥的風險。瘦素能夠抑制胰高血糖素的分泌，刺激β細胞分泌更多的胰島素，但是胰高血糖素能夠減弱瘦素介導的胰島素的分泌。胰島α細胞還能表達一種胃饑餓素受體，當與胃饑餓素作用后會增加胰高血糖素的分泌。另外，糖皮質激素也能夠根據(jù)血糖濃度對胰高血糖素和胰島素的分泌進行調(diào)節(jié)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中Glucagon的濃度，其原理見圖1。Glucagon特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的Glucagon會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗Glucagon抗體后，生物素化抗Glucagon抗體與Glucagon結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。Glucagon濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中Glucagon濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

PG357-1

Glucagon抗體預包被板

8孔×12條

PG357-2

樣品分析緩沖液

5ml

PG357-3

標準品稀釋液

10ml

PG357-4

Glucagon標準品

2-4瓶

PG357-5

Glucagon生物素化抗體

10ml

PG357-6

辣根過氧化物酶標記Streptavidin

10ml

PG357-7

洗滌液(20X)

30ml

PG357-8

TMB溶液

10ml

PG357-9

終止液

5ml

PG357-10

封板膜(透明)

2張

PG357-11

封板膜(白色)

2張

–

說明書

1份

保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其他組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。