PI461
Human IGFBP4 (C-terminal Fragment) ELISA Kit
96次

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的Human IGFBP4 (C-terminal Fragment) ELISA Kit (Human IGFBP4 (C-terminal Fragment) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4 C端片段酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿等樣品中的IGFBP4 C端片段的ELISA試劑盒。IGFBP4的N端片段和C端片段已被發(fā)現(xiàn)是心血管疾病的新標(biāo)志物。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為1.25ng/ml，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 4, IGFBP4)是IGFBP家族成員之一，該家族中至少包括6種高親和力的IGF結(jié)合蛋白(Insulin-like Growth Factor Binding Protein, IGFBP)和4種低親和力的IGFBP相關(guān)蛋白(IGFBP-rP)。所有IGFBP家族成員蛋白都是富含半胱氨酸的蛋白質(zhì)，具有保守的半胱氨酸殘基，主要聚集在蛋白的氨基端和羧基端。
IGFBPs參與調(diào)節(jié)IGF蛋白的生物學(xué)活性，其中的一些IGFBPs同時還具有其內(nèi)在的生物活性。IGFBP的翻譯后修飾方式主要包括糖基化、磷酸化和水解作用，這些修飾會影響其與IGF的親和力大小。ALS (Acid Labile Subunit)是一種來源于肝臟的蛋白質(zhì)，其主要存在于某些IGFBP和IGF組成的三元復(fù)合物中，ALS能夠增加IGF/IGFBP復(fù)合物在血液循環(huán)中的半衰期。另外，IGFBP-4與IGF復(fù)合物能夠被一種金屬蛋白酶PAPP-A裂解，并且其裂解位點是高度特異性的。IGFBP-4經(jīng)PAPP-A在Met135-Lys136位點酶切后會形成N端(14.6kDa，簡稱IGFBP4-NT)和C端(11.3kDa，簡稱IGFBP4-CT)兩個片段，并且從IGF/IGFBP復(fù)合物中釋放出來。IGFBP4-NT和IGFBP4-CT都是PAPP-A介導(dǎo)的IGFBP-4的水解產(chǎn)物。有研究表明，IGFBP-4的N和C片段可為ST段抬高型心肌梗死病人心血管事件提供預(yù)測價值，是心肌缺血病人主要不良心血管事件(Major adverse cardiovascular events, MACEs)短期評價的新型標(biāo)志物。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IGFBP4-CT的濃度，其原理見圖1。人IGFBP4-CT特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的人IGFBP4-CT會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IGFBP4-CT抗體后，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IGFBP4-CT抗體與人IGFBP4-CT結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IGFBP4-CT濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人IGFBP4-CT濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

PI461-1
人IGFBP4-CT抗體預(yù)包被板
8孔×12條

PI461-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml

PI461-3
人IGFBP4-CT標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

PI461-4
辣根過氧化物酶標(biāo)記人IGFBP4-CT抗體
10ml

PI461-5
洗滌液(20X)
30ml

PI461-6
TMB溶液
10ml

PI461-7
終止液
5ml

PI461-8
封板膜(透明)
2張

PI461-9
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。