PV957
Mouse VEGF ELISA Kit
96次

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的Mouse VEGF ELISA Kit (Mouse Vascular Endothelial Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠血管內(nèi)皮生長因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的VEGF的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為6.7pg/ml，與人VEGF121、VEGF165、PLGF等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF或VEGF-A)，又稱血管通透因子(Vascular Permeability Factor, VPF)，是調(diào)控胎兒和成人血管生成的重要調(diào)節(jié)因子。VEGF屬于血小板源性生長因子(Platelet Derived Growth Factor, PDGF)家族，結(jié)構(gòu)上具有8個保守的半胱氨酸殘基，并通過二硫鍵形成反向平行的二聚體。小鼠體內(nèi)存在長度分別為120、164和188個氨基酸長度的VEGF異構(gòu)體，人體內(nèi)的VEGF主要有氨基酸長度分別為121、145、165、183、189和206這幾種亞型，其中VEGF165在人體內(nèi)含量最多且活性最強，其次是VEGF121和VEGF189。小鼠VEGF164與大鼠相應(yīng)的VEGF具有97%的氨基酸同源性，與人和豬的VEGF具有89%的氨基酸同源性，與牛VEGF具有88%氨基酸同源性，與貓、馬和犬VEGF具有90%的氨基酸同源性。VEGF在多種細胞和組織中均有表達，例如骨骼肌和心肌組織、肝細胞、成骨細胞、中性粒細胞、巨噬細胞、角質(zhì)細胞、褐色脂肪組織、CD34+干細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和血管平滑肌細胞等。缺氧或在IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等其他細胞因子刺激下，上述這些組織和細胞就會表達VEGF。。
VEGF主要參與血管生成過程。在胚胎形成時期，VEGF調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和存活，從而調(diào)節(jié)血管密度，但并不能調(diào)節(jié)所形成血管的類型。通過招募成骨細胞和成軟骨細胞，VEGF還能促進骨生成，同時VEGF還是單核細胞的化學(xué)引誘物。在嬰兒體內(nèi)，VEGF能夠維持內(nèi)皮細胞完整性，同時還是血管內(nèi)皮細胞的促細胞分裂素。在成人體內(nèi)，VEGF主要在傷口恢復(fù)和女性的生殖周期中發(fā)揮作用。在病變組織中，VEGF能夠提高血管通透性，因此VEGF被認為能夠通過促進腫瘤部位血管新生從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移。游離的VEGF水平被認為與部分自身免疫疾病狀況相關(guān)。
VEGF二聚體與兩個受體酪氨酸激酶結(jié)合，VEGF R1(Flt-1)和VEGF R2(Flk-1/KDR)，隨后誘導(dǎo)二者的同源二聚化和自身磷酸化。受體主要表達在血管內(nèi)皮細胞和一些非內(nèi)皮細胞上，盡管VEGF R1對VEGF的親和力更高，但VEGF R2才是VEGF發(fā)揮活性的主要調(diào)節(jié)受體。VEGF與受體結(jié)合后，能夠激活Ras/MAPK、FAK/paxillin及PI3K/AKT等信號通路調(diào)節(jié)細胞增殖、基因表達及血管通透性等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠VEGF的濃度，其原理見圖1。小鼠VEGF特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠VEGF會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗小鼠VEGF抗體后，生物素化抗小鼠VEGF抗體與小鼠VEGF結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠VEGF濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠VEGF濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝

PV957-1

小鼠VEGF抗體預(yù)包被板

8孔×12條

PV957-2

樣品分析緩沖液

5ml

PV957-3

標準品稀釋液

10ml

PV957-4

小鼠VEGF標準品

2-4瓶

PV957-5

小鼠VEGF生物素化抗體

10ml

PV957-6

辣根過氧化物酶標記Streptavidin

10ml

PV957-7

洗滌液(20X)

30ml

PV957-8

TMB溶液

10ml

PV957-9

終止液

5ml

PV957-10

封板膜(透明)

2張

PV957-11

封板膜(白色)

2張

–

說明書

1份

保存條件：
??????標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。