Megazyme 交聯(lián)β-葡聚糖含量試劑盒K-BGLU說明書
交聯(lián)β-葡聚糖含量測定 AACC 32-23
6.2.1實驗目的
在大麥、麥芽、麥芽汁和啤酒產(chǎn)品質(zhì)量控制中經(jīng)常需要測定其中的β-葡聚糖含量，Megazyme方法很好的解決了測定中的系列問題，本方法能夠在一天內(nèi)測定50-100個樣品。本方法現(xiàn)在也適用于燕麥產(chǎn)品及燕麥纖維產(chǎn)品β-葡聚糖含量測定。
6.2.2實驗原理
樣品水化后加入真菌多糖酶在pH6.5緩沖液中培養(yǎng)，提取液離心（或過濾）后加入β-葡萄糖苷酶，在葡糖糖氧化－過氧化酶緩沖液保護下產(chǎn)生葡萄糖。
Megazyme測試包：（可以測定100個樣品）
⑴全套測定方法；⑵真菌多糖酶；⑶β-葡萄糖苷酶；⑷葡糖糖標準液；⑸大麥和燕麥纖維標準樣品。
6.2.3實驗試劑：
⑴真菌淀粉酶（bottle 1）〔（1-3）（1-4）β-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶〕：（活力>1000U/mL）
制備：1.0mL真菌淀粉酶用20mM NaH2PO4緩沖液（pH6.5）稀釋至20.0mL。將溶液分裝成5.0mL在冰箱中冷凍保存。最終真菌淀粉酶濃度50U/mL。
⑵β-葡萄糖苷酶（bottle 2）：（活力>40U/mL）
制備：將1.0mLβ-葡萄糖苷酶用50.0mM醋酸鈉緩沖液（pH4.0）稀釋至20.0mL。將溶液分裝成5.0mL在冰箱中冷凍保存。最終β-葡萄糖苷酶濃度2U/mL。
⑶葡糖糖標準液：100μg?0.1mL，用0.2%疊氮化鈉溶液溶解。
⑷大麥標準樣品：含量見標簽。
⑸燕麥纖維標準樣品：含量見標簽。
⑹NaH2PO4緩沖液制備（20mM，pH6.5）：3.12g NaH2PO4－2H2O溶解于900ml蒸餾水中，用100mM氫氧化鈉溶液（4g/L）將pH值調(diào)至6.5（大約需50mL），加0.2g疊氮化鈉，將溶液定容至1L。4℃保存。
⑺醋酸鈉緩沖液（50mM，pH4.0）：飽和醋酸（2.9mL）加入900mL蒸餾水，用1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至4.0，加0.2g疊氮化鈉，將溶液定容至1L，4℃保存。
⑻葡萄糖氧化－過氧化酶緩沖液：建議使用Megazyme測試包里的高純度葡萄糖氧化溶液和葡糖糖過氧化酶。將測試包的葡萄糖工作液（bottle 3）（50mL）稀釋至1L。把測試包中的葡萄糖測定液（bottle 4）用1L葡萄糖工作液溶解（簡稱GOPOD）。為了保證GOPOD溶液的穩(wěn)定性，應該在低溫條件下在棕色瓶中避光保持。測定過程中從冰箱中取出的涼的GOPOD溶液可以直接加入測定管。
葡萄糖工作液包括：CaHPO4－2H2O（136.0g），NaOH （42.0g），酸（30.0g），疊氮化鈉（4.0g）。
6.2.4儀器需求：
⑴聚丙烯具塞試管（35mL）；
⑵移液器：量程分別為100μL，200μL，5.0mL（用于Na2HPO4緩沖液和葡萄糖氧化－過氧化酶緩沖液），25mL（用蒸餾水）。
⑶頂載天平：1/1000g。
⑷漩渦混合器；
⑸分光光度計：510nm。
⑹水浴鍋：40℃和100℃水浴鍋各一個。
⑺秒表：一只。
⑻離心機：離心力100g。
⑼試驗粉碎機：細度0.5mm。
6.2.5測定步驟：
⑴將燕麥用試驗粉碎機粉碎成細度0.5mm的顆粒。
⑵仔細稱量燕麥粉樣品（0.5g左右），放入35mL聚丙烯具塞試管。樣品需要已知水分含量，以便最后轉(zhuǎn)為干基。
⑶向試管中加入1.0mL 50%（v/v）的乙醇溶液，使樣品充分潤濕。
⑷加入5.0mL NaH2PO4緩沖液（20mM，pH6.5），在漩渦混合器上充分混合。
⑸將試管放入100℃水浴鍋中保溫5min。每隔0.5min取出快速在漩渦混合器上混合。前2.0min加熱及混合效果對于結(jié)果影響較大。
⑹將試管在室溫下降至40℃，向每個試管加入0.2mL真菌淀粉酶（10U）。試管加蓋，震蕩混勻，放入40℃水浴鍋中保溫1h。每隔10min將樣品在漩渦混合器上混合。
⑺向每個試管加入24mL蒸餾水，將溶液體積調(diào)整為30mL。
⑻將試管放入離心機中，在1000g離心力下離心10min。
⑼用移液槍移取0.1mL樣品液，分別放入3個玻璃試管。一個玻璃試管作對照，另外兩個為代測樣品。
⑽按如圖6.1所示加入試劑。黑色方框為比色杯。一次可以同時完成11個樣品的測試。
⑾將玻璃試管放入40℃水浴鍋中保溫15min。
⑿向每支試管加入3.0mL GOPOD溶液，在40℃水浴鍋中保溫20min。
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⒀將試管中液體轉(zhuǎn)入1.0cm比色杯，在510nm測定吸光度。1h內(nèi)完成測定。
⒁計算β-葡聚糖含量：
樣品干重＝樣品重量×（100-水分含量）/100
β-葡聚糖含量（％ w/w）＝吸光度×F×300×（1/1000）×（100/W）×（162/180）
＝吸光度×（F/W）×27
F＝100/葡糖糖標準溶液吸光度；
300為體積校正系數(shù)；
162/180為將游離葡萄糖轉(zhuǎn)化為脫水葡萄糖；
W＝樣品干重；