Phos-tag™ Biotin ?無特異性磷酸化抗體時的好選擇

Phos-tag™ Biotin是與生物素結(jié)合的Phos-tag™，可用于免疫印跡法檢測磷酸化蛋白。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可靈敏檢測PVDF膜上的磷酸化蛋白。

◆原理

◆優(yōu)點(diǎn)、特色

●??無輻射。

●??無需PVDF膜的封閉處理。

●??Phos-tag™ 的特異性結(jié)合與氨基酸種類、序列無關(guān)。

●??可適用于免疫印跡和質(zhì)譜分析等后續(xù)工作。

●???Phos-tag™ BTL母液可穩(wěn)定保存至少6個月。

●??實(shí)驗(yàn)流程與使用HRP標(biāo)記抗體相類似。

※BTL-104、BTL-105、BTL-111三者連接鏈（Linker）長度不一，但使用上基本相同。BTL-111靈敏度最高。

◆案例、應(yīng)用

【使用例：在PVDF 膜上檢測磷酸化蛋白】

轉(zhuǎn)印在PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精確檢測到ng級水平，沒有檢測到相應(yīng)的去磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的信號斑點(diǎn)。

免疫印跡檢測磷酸化蛋白——Phos-tag ™ 生物素。

摘自Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749

【使用例：Phos-tag™ 生物素在檢測蛋白激酶活性的微陣列（生物芯片）中的運(yùn)用】

蛋白激酶是很多疾病診斷和藥物篩選的靶標(biāo)。近來有科研人員研發(fā)了一種檢測胞內(nèi)蛋白激酶活性的高靈敏度多肽微陣列。用微陣列點(diǎn)樣機(jī)點(diǎn)樣2nL體積的底物多肽溶液，使多肽固定在戊二醛預(yù)修飾的高氨基末端載玻片。

當(dāng)多肽經(jīng)細(xì)胞裂解液磷酸化后，用熒光標(biāo)記的抗phosphotyrosine（磷酸化酪氨酸）抗體檢測酪氨酸激酶，或者用Phos-tag™ 生物素，接著用熒光標(biāo)記的親和素檢測絲氨酸或者蘇氨酸激酶。之后用自動微陣列掃描儀檢測熒光信號。多肽微陣列系統(tǒng)包括簡單的多肽固定，只需少量樣品，具有高密度陣列。重要的是，檢測細(xì)胞裂解液蛋白激酶活性的靈敏度高。

因此多肽微陣列系統(tǒng)可用于高通量篩選細(xì)胞內(nèi)激酶活性，可用于藥物篩選和疾病診斷。