Wako結(jié)腸癌造模誘導(dǎo)結(jié)腸癌造模誘導(dǎo)劑-偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

結(jié)腸癌造模誘導(dǎo)劑（Wako/Sigma）

偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

基本描述：

偶氮甲烷（氧化偶氮甲烷），英文Azoxymethane，縮寫AOM，可有效誘導(dǎo)大小鼠結(jié)腸癌，廣泛用作一種基質(zhì)引起實(shí)驗(yàn)動物發(fā)生結(jié)腸腫瘤，從而研究癌癥預(yù)防物和癌癥形成機(jī)制。另外，越來越多結(jié)腸癌病例的發(fā)生，使得癌癥預(yù)防物的研究也越來越流行。按照每周一次皮下注射AOM（15mg/kg體重）進(jìn)入大鼠體內(nèi)，連續(xù)3周給藥。數(shù)周后能觀察到癌前期病變。

作用機(jī)制：偶氮甲烷（AOM）能誘導(dǎo)DNA產(chǎn)生O6-甲基鳥嘌加合物，導(dǎo)致G→A轉(zhuǎn)化。

主要應(yīng)用：偶氮甲烷（AOM）常聯(lián)合DSS（Mw：36000-50000 Da）注射動物，建立結(jié)腸癌模型，用來研究癌癥發(fā)展機(jī)制和化學(xué)預(yù)防。

基本特征：

1）??CAS NO. 25843-45-2

2）??線性分子式：CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3）??分子量：74.08

4）??純度：≥98%

5）??結(jié)構(gòu)式：

結(jié)腸癌（Colon cancer）模型建立案例：

1、??文獻(xiàn)來源：Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1????DSS溶液制備（2% DSS溶液）：溶解10gDSS于500ml無菌的飲用水中，使用前溶液保存在4℃，好現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2????AOM溶液制備：用無菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝后放到-20℃保存，避免反復(fù)凍融。使用之前，融化分裝母液并用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。

1.3????小鼠結(jié)腸炎相關(guān)的依賴性結(jié)直腸癌造模方法

1）??第1天稱重和標(biāo)記小鼠；

2）??按10 mg/kg體重的劑量腹腔注射AOM溶液；

3）??加DSS溶液灌滿小鼠籠內(nèi)的飲水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天加量，對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水；

4）??第3天清空籠子內(nèi)剩余的DSS飲用水，過兩天重新裝滿DSS溶液；

5）??第5天清空籠子內(nèi)剩余的DSS飲用水，重新裝滿DSS溶液；

6）??第8天清空籠子內(nèi)剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無菌水持續(xù)14天；

7）??第22-26天重復(fù)第3）-5）步；

8）??第29天清空籠子內(nèi)剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無菌水持續(xù)14天；

9）??第43-47天重復(fù)第3）-5）步；

10）第50天清空籠子內(nèi)剩余的DSS溶液，換上不含DSS的無菌水；

2、文獻(xiàn)來源：Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制備（2.5% DSS溶液）：稱取2.5g DSS溶于100ml無菌水，本溶液置于4℃可穩(wěn)定保存1周。好現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.2 AOM溶液制備：用無菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝后放到-20℃保存，避免反復(fù)凍融。AOM在水或生理鹽水中的穩(wěn)定性高于PBS緩沖液，且在玻璃管內(nèi)穩(wěn)定性好于塑料管。使用之前，融化分裝母液并用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。

2.3 小鼠結(jié)腸癌造模方法

1）第1天稱重，等數(shù)分組并標(biāo)記小鼠；

2）按照10mg/kg體重的濃度計(jì)算所需的AOM量，取適量的AOM儲存液（10mg/ml）用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。

3）腹腔注射AOM工作液（劑量10mg/kg體重，則10g體重小鼠注射100ul工作液）到實(shí)驗(yàn)組小鼠，同時注射等體積的無菌生理鹽水到對照組小鼠。

4）自此步之后，按照兩種方法繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。若建立自發(fā)性腫瘤進(jìn)展模型，見方案A；若建立慢性炎癥驅(qū)動的腫瘤進(jìn)展模型，見方案B。

方案A，自發(fā)性腫瘤進(jìn)展模型

A1，第8天重復(fù)步驟1）-3）；

A2，第15天重復(fù)步驟1）-3）；

A3，第22天重復(fù)步驟1）-3）；

A4，第29天重復(fù)步驟1）-3）；

A5，第36天重復(fù)步驟1）-3）；【到這步每只小鼠都腹腔注射給藥6次】

A6，第一次注射后的3個月評估癌前病變，此時不需處死動物。

A7，第一次注射后的6個月評估腫瘤發(fā)展。

方案B，慢性炎癥驅(qū)動的腫瘤進(jìn)展（Chronic inflammation-driven tumor progression）

B1，制備2.5%（wt/v）DSS溶液。此濃度的DSS能讓FVB/N小鼠和其他品系產(chǎn)生良好的造模效果。

B2，按3天的用量加DSS溶液灌滿小鼠籠內(nèi)的飲水槽，以5ml DSS溶液/小鼠/天用量，對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水；

B3，第4天清空飲水槽內(nèi)殘留DSS溶液，并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B4，第6天清空飲水槽內(nèi)殘留DSS溶液，并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B5，第8天清空飲水槽內(nèi)殘留DSS溶液，并且重新灌滿滅菌水。

B6，第22-29日重復(fù)步驟B1）-B5）。

B7，第40日評估癌前病變，此時不需處死動物。

B8，第53-60日重復(fù)步驟B1）-B5）。

B9，第80日評估腫瘤發(fā)展。

2.4?AOM誘導(dǎo)腫瘤圖示（圖1）

圖1.內(nèi)窺鏡腫瘤調(diào)研。通過迷你腔鏡監(jiān)測AOM誘導(dǎo)的腫瘤形成情況。a）還能用于縱向研究；b）對于腫瘤負(fù)荷分析，每只小鼠的腫瘤大小按照預(yù)設(shè)的時間點(diǎn)記錄并做總和。

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DSS（Mw：36000-50000 Da）

動物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)(包括新藥篩選)研究。人類疾病的發(fā)展十分復(fù)雜，以人本身作為實(shí)驗(yàn)對象來深入探討疾病發(fā)生機(jī)制，推動醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展來之緩慢，臨床積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時間和空間上都存在局限性，而且許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法上也受到限制。而借助于動物模型的間接研究，可以有意識地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素，以便更準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與人類疾病進(jìn)行比較研究，有助于更方便，更有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。