Wako 292-81101生物制藥殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法）
生物制藥殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法）殘留DNA提取試劑盒遵照中國(guó)藥典記載的碘化鈉法，適用于疫苗和治療用生物制品所含宿主細(xì)胞殘余DNA的提取。
殘留DNA提取試劑盒可以提取樣品中含有的極微量的DNA，回收率較高。DNA的提取操作時(shí)間為60-90 min。提取的DNA可以通過(guò)qPCR進(jìn)行定量。
◆特點(diǎn)
● 遵照中國(guó)藥典登載的碘化鈉法*1
● 高回收率
● 單管操作（無(wú)需換管）?，耗時(shí)僅60-90 min
● 不需要苯酚和氯仿等有機(jī)溶劑
● 兼容多種DNA
*1 為使DNA檢測(cè)方法與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)保持同步，中國(guó)藥典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立殘留細(xì)胞DNA檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。碘化鈉法將作為殘留DNA提取方法，被新增至2020版的中國(guó)藥典中。
◆原理
1. 使樣品中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)溶于碘化鈉和N-月桂基肌氨酸鈉；
2. 異丙醇與糖原選擇性地共沉淀DNA。
◆使用方法
方法1
方法2
◆應(yīng)用實(shí)例
DNA spiking test（加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)）
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■ 實(shí)驗(yàn)方案
方案1：血清中DNA 提取操作步驟
試劑準(zhǔn)備：
1） DNA 提取之前，試劑提取如下：
26 ml 碘化鈉溶液加入6 ml 蒸餾去離子水稀釋，
再加入1 ml 月桂酰肌氨酸鈉和65 μl 糖原溶液并混合均勻。
2） 向洗滌溶液（B）加入2 μl 糖原溶液并立即混合均勻。
注意事項(xiàng)：
1） 用于稀釋Nal 溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2） 配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原溶液到無(wú)菌離心管中至合適體積即可。
3） 在保存期間Nal 溶液會(huì)結(jié)晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
DNA 提取步驟：
1） 吸取100 μl 的血清樣品加入1.5 ml 微量離心管；
2） 再加入300 μl 配制好的Nal 溶液至離心管并混合均勻；
3） 將離心管在60℃恒溫容器中加熱15 分鐘；
4） 取出離心管，加入400 μl 異丙醇至離心管并混合均勻；
5） 離心管在室溫靜置15 分鐘后離心10,000 g 15 分鐘；
6） 盡可能多地吸取上清液，將離心管倒置在紙面上除去殘留溶液；
7） 加入1 ml 配制好的洗滌溶液（B）重懸浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀從離心管壁上彈開；
8） 短暫離心10,000 g 5 min，去除上清液，將剩余沉淀真空干燥，用于后續(xù)的DNA 分析。
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方案2: Threshold* 系統(tǒng)DNA定量法的預(yù)處理
試劑預(yù)處理:
1） 將65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化鈉溶液；
2） 將2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗滌溶液（B），立即混合均勻。
注意事項(xiàng)：
1） 用于稀釋碘化鈉溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2） 配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原 溶液到無(wú)菌離心管中至合適體積即可。
3） 在保存期間碘化鈉溶液會(huì)結(jié)晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4） 提取步驟應(yīng)在DNA 變性之前，因此重要的是使用無(wú)菌技術(shù)盡可能降低DNA 污染。預(yù)先包裝好的無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管和手套都要經(jīng)過(guò)此步驟。
DNA 提取步驟：
1） 吸取400 μl 或500 μl 的樣品加入2 ml 無(wú)菌帶蓋微量離心管并混合均勻；
2） 吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸鈉溶液加入微量離心管并混合均勻；
3） 再加入500 μl 包含糖原的碘化鈉溶液至混合溶液，渦旋后在40℃保溫15 分鐘；
4） 加入900 μl 異丙醇至混合溶液，渦旋后靜置于室溫15 分鐘；
5） 短暫離心10,000 g 15 min 后，能看見(jiàn)管壁有白色沉淀，吸取上清液后將離心管倒置于紙面去除殘留溶液；
6） 加入800 μl 洗滌溶液（A）至離心管，劇烈渦旋使白色沉淀從離心管壁上彈開；
7） 短暫離心10,000 g 5 min 后，去除殘留溶液；
8） 加入1500 μl 包含糖原的洗滌溶液（B）至離心管并渦旋，短暫離心10,000 g 5 min 后吸取上清液，剩余的白色沉淀包括DNA 和糖原載體；
9） 加入分析用緩沖液(Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后續(xù)的DNA 分析。
DNA Extractor™ Kit可以高產(chǎn)量提取殘留DNA，甚至少量殘留DNA。
■ 試劑
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1．試劑盒組分：
1）碘化鈉溶液??1 x 26 ml
2）月桂酰肌氨酸鈉??1 x 1.2 ml
3）洗滌溶液（A）??1 x 42 ml
4）洗滌溶液（B）??2 x 40 ml
5）糖原溶液??1 x 0.1 ml
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2．必需的試劑和儀器：
試劑：
1）異丙醇（特級(jí)） 40 ml
2）蒸餾去離子水 6 ml
儀器：
1）微型離心機(jī)（Max. 12,000 g）
2）有蓋微量離心管（1.5 or 2 ml）
3）旋渦混合器
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■ 保存
2 – 10℃，試劑盒的保存期為2 – 3 年。
◆試劑盒構(gòu)成
| 產(chǎn)品編號(hào) | 內(nèi)容物 | 內(nèi)容量 |
| 299-81111 | 碘化鈉溶液, CP | 26 mL |
| 296-81121 | N-月桂酰肌氨酸鈉溶液, CP | 1.2 mL |
| 293-81131 | 洗凈液A, CP | 42 mL |
| 290-81141 | 洗凈液B, CP | 40 mL |
| 297-81151 | 糖原溶液, CP | 0.1 mL |
備注：每種成分不單獨(dú)出售
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| 292-81101 | 殘留DNA提取試劑盒（碘化鈉法） DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method) |
50 tests |
溫馨提示：不可用于臨床治療。
| Wako DNA Extractor?提取試劑盒產(chǎn)品選擇 | ||||||||
| 樣本 | 全血 | 血清 | 血漿 | 組織 | 石蠟包埋組織切片 | 生物制藥 | 培養(yǎng)細(xì)胞 | 頭發(fā)、指甲、血跡、唾液 |
| 基因組DNA | DNA Extractor ? WB Kit DNA Extractor ? WB-Rapid Kit |
DNA Extractor ? WB Kit | DNA Extractor ? SP kit DNA Isolator PS-Rapid Reagent |
DNA Extractor ? WB Kit | DNA Extractor ? FM kit | |||
| 線粒體DNA（mt DNA） | mtDNA Extractor ? WB Kit |
mtDNA Extractor? WB Kit | mtDNA Extractor ? CT Kit |
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| 游離DNA | DNA Extractor ? SP kit | DNA Extractor ? SP kit | ||||||
| 低氧化程度的DNA | DNA Extractor ? WB Kit | DNA Extractor ? TIS kit | DNA Extractor ? TIS kit | |||||
| 細(xì)菌基因組DNA | DNA Extractor ? kit | DNA Extractor ? kit | ||||||
| 病毒DNA | DNA Extractor ? kit | |||||||
| DNA Extractor? 系列產(chǎn)品列表 | ||||||||
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 樣品類型 | 原理 | 特點(diǎn) | 試劑盒組成 | ||
| 生物制品中的殘余DNA提取 | ||||||||
| 295-50201 | DNA Extractore? Kit Wako 生物制藥殘余DNA抽提試劑盒 |
50次 | 生物制藥 血清 |
碘化鈉法 | 生物制品中的殘余DNA提取 | 碘化鈉溶液 月桂酰肌氨酸鈉溶液 洗滌液(A) 洗滌液(B) 糖原溶液 |
26ml×1 1.2mL×1 42mL×1 40mL×2 0.1mL×1 |
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| 血清和血漿中的DNA提取 | ||||||||
| 296-60501 | DNA Extractor? SP Kit 血清血漿中DNA抽提試劑盒 |
50次 | 血清和 血漿 |
碘化鈉法 | 1、高靈敏度僅需100 μL血清或血漿樣品，高DNA產(chǎn)量; 2、整個(gè)提取過(guò)程在單獨(dú)的離心管中，無(wú)交叉污染; 3、特別配制的乙醇能完全去除血液中的脂質(zhì) |
酶反應(yīng)液 蛋白質(zhì)消化液 碘化鈉溶液 乙醇溶液 洗滌液(A) 洗滌液(B) |
10ml×1 25μL×1 15mL×1 30mL×1 50mL×1 50mL×1 |
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| 人和動(dòng)物組織中的DNA提?。ㄓ糜?-羥基脫氧鳥苷檢測(cè)） | ||||||||
| 296-67701 | DNA Extractor? TIS Kit 人和動(dòng)物薄壁組織中尿8-羥基脫氧鳥苷DNA抽提試劑盒 |
50次 | 組織培養(yǎng) 細(xì)胞 |
碘化鈉法 | 1、用于8-羥基脫氧鳥苷(氧化應(yīng)激標(biāo)志物）檢測(cè)和鑒定； 2、抗氧化劑阻止更進(jìn)一步的DNA氧化 |
裂解液 酶反應(yīng)液 蛋白酶溶液 蛋白消化液 氧化抑制劑 碘化鈉溶液 乙醇溶液 PEG溶液 |
75mL×2 15ml×1 50μL×1 750μL×1 350μL×1 15mL×1 30mL×1 20mL×1 |
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| 全血中的DNA提取 | ||||||||
| 291-50502 | DNA Extractor? WB Kit 全血DNA抽提試劑盒 |
50次 | 全血 組織 培養(yǎng)細(xì)胞 |
碘化鈉法 | 1、高DNA回收率; 2、整個(gè)提取過(guò)程在單獨(dú)的離心管中，無(wú)交叉污染 |
裂解液 酶反應(yīng)液 碘化鈉溶液 洗滌液(A) 洗滌液(B) 蛋白酶 |
65ml×2 10mL×1 15mL×1 50mL×1 50mL×1 10mg×1 |
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| 297-54801 293-54803 |
DNA Extractor? WB-Rapid Kit 全血DNA抽提試劑盒 |
20次 200次 |
全血 | 比DNA Extractor? WB Kit實(shí)驗(yàn)步驟更少、提取時(shí)間更短(30分鐘以內(nèi))。 | 裂解液 酶反應(yīng)液 洗滌液 蛋白酶溶液 |
20次反應(yīng) 10mL×1 0.8mL×1 20mL×1 40μL×1 |
200次反應(yīng) 50mL×1 8mL×1 70mL×3 400μL×1 |
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| 石蠟包埋組織的DNA提取 | ||||||||
| 295-52401 | DNA Isolator PS Kit 石蠟包埋組織DNA抽提試劑盒 |
100次 | 石蠟包埋 組織 |
酶反應(yīng)液 酶激活劑 蛋白酶 DNA沉淀促進(jìn)劑 DNA稀釋劑 |
2ml×1 34mg×1 2.2mg×1 0.5mL×1 0.5mL×1 |
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| 291-56401 | DNA Isolator PS-Rapid Reagent 石蠟包埋組織DNA抽提試劑盒 |
100次 | 石蠟包埋 組織 |
煮沸法 | DNA提取溶液 | 10mL×5 | ||
| 全血中線粒體DNA提取 | ||||||||
| 293-54401 | mtDNA Extractor? WB Kit 全血中線粒體DNA抽提試劑盒 |
25次 | 全血 | 碘化鈉法 | 全血中線粒體 DNA提取可在90分鐘內(nèi)完成 | 白血球提取溶液 DNA提取溶液| DNA提取溶液||（A） DNA提取溶液||（B） DNA提取溶液||| 碘化鈉溶液 洗滌液 |
5.0ml×1 26.5ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1 |
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| 培養(yǎng)細(xì)胞和組織樣品中的線粒體DNA提取 | ||||||||
| 291-55301 | mtDNA Extractor? CT Kit | 25次 | 組織 培養(yǎng)細(xì)胞 |
碘化鈉法 | 培養(yǎng)細(xì)胞和組織樣品中的線粒體 DNA提取 |
勻漿液援沖液 DNA提取溶液| DNA提取溶液||（A） DNA提取溶液||（B） DNA提取溶液||| 碘化鈉溶液 洗滌液 |
25.0ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.3ml×1 1.9mL×1 7.5mL×1 50mL×1 |
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| 法醫(yī)學(xué)調(diào)查的DNA提取 | ||||||||
| 295-58501 | DNA Extractor? FM Kit 法醫(yī)學(xué)研究DNA抽提試劑盒 |
50次 | 頭發(fā) 指甲 血跡 唾液 |
碘化鈉法 | 在幾十分鐘內(nèi)可溶解多種毛發(fā) | 裂解液 酶激活試劑（EAR) 再水化液 蛋白酶 碘化鈉溶液 洗滌液（A） 洗滌液（B） |
9.5ml×1 80mg×1 0.5ml×1 10mg×1 12.5mL×1 50mL×1 50mL×1 |
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| 上述試劑僅供實(shí)驗(yàn)研究用，不可用作“醫(yī)藥品”、“食品”、“臨床診斷”等。 | ||||||||