從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片中純化總RNA
上海金畔生物科技有限公司提供凱杰Qiagen 石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒 RNeasy FFPE Kit (50) 73504，品質保證，價格優(yōu)惠，全國聯(lián)保，歡迎咨詢。

創(chuàng)新的方法用于克服福爾馬林造成的交聯(lián)

有效的釋放RNA而不破壞其完整性

高效的實驗方案，在85分鐘內即可獲得純化的RNA

RNeasy FFPE Kit專為從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片中純化總RNA而設計。獨特的裂解和孵育條件逆轉福爾馬林對RNA的修飾。并且裂解緩沖液可將RNA從組織切片中有效釋放出來，防止RNA的進一步降解。試劑盒同樣使用DNase和DNase Booster Buffer優(yōu)化，去除基因組DNA的污染。使用RNeasy MinElute離心柱純化獲得的總RNA，洗脫體積可小至10 μl。整個純化流程可在QIAcube全自動核酸純化儀上全自動進行。

Performance

使用RNeasy FFPE Kit從固定和包埋的樣本中純化獲得的RNA的產量比用其他方法更高（參見”Greater yields of RNA”）。回收得到的完整RNA最小可達70 nt，并且?guī)缀鯖]有基因組DNA的污染（參見”Recovery of all usable RNA”）。用該試劑盒從FFPE樣本中純化得到的RNA片段非常適用于real-time RT-PCR等敏感的下游應用（參見”Reliable results in real-time RT-PCR analysis”和”Successful real-time RT-PCR analysis”）。

Principle

用福爾馬林固定組織會導致RNA-RNA和RNA-蛋白質的交聯(lián)，這會影響RNA在酶學分析中的性能。FFPE樣本固定和包埋同樣會導致核酸的嚴重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了獨特的裂解和孵育條件來逆轉福爾馬林對RNA的修飾。裂解緩沖液能使RNA從FFPE組織樣本中有效釋放，并防止進一步的RNA降解。經優(yōu)化的條件能純化得到所有可用的RNA，使用RNeasy FFPE Kit從FFPE樣本中得到的RNA的產量比其他方法更高。

Procedure

整個RNeasy FFPE操作流程可在85分鐘內完成（參見”RNeasy FFPE procedure”）。使用蛋白酶K裂解樣本僅需15分鐘。裂解后，樣本在80oC下孵育15分鐘。之后，用DNase處理能有效去除樣本中的基因組DNA，包括小的DNA片段。最后，使用RNeasy MinElute離心柱即可收集純化的RNA，洗脫體積14–30 μl。純化過程可在QIAcube全自動核酸純化儀上全自動進行。

Applications

RNeasy FFPE Kit可純化FFPE 樣本中所有大于70 nt RNA，得到適用于RT-PCR等眾多下游應用的RNA片段。但是，從FFPE樣本中純化得到的RNA會嚴重片段化，不能用于需要完整RNA的下游應用。如果使用片段化RNA可能需要做些修飾（例如在RT-PCR時設計小的擴增子）。進行cDNA合成時，不能使用oligo-dT引物，而要使用隨機或基因特異性引物。

Features

Specifications

應用

PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray

洗脫體積

14–30 μl

規(guī)格

Spin column

主要樣本類型

FFPE tissue samples

處理

Manual (centrifugation), automated (QIAcube)

純化總RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白

RNA

樣本量

1*5 μm to 4*10μm sections

技術

Silica technology

每次運行或制備時間

70 minutes

產量

Varies