內參用于標準化

洗脫體積最小化

高純度RNA，適合多種下游應用

簡單、靈敏的操作流程

自動化實驗方案

miRNeasy Serum/Plasma Kit包括檢測miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control的miScript Primer Assay，提供一個方便的系統(tǒng)用于標準化。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control（需單獨訂購）是C. elegans miR-39 miRNA的類似物，以每管10 pmol凍干粉形式提供。

Performance

miRNeasy Serum/Plasma Kit可從至多200 μl血清或血漿中有效純化RNA。miRNeasy Kits制備的RNA純度高，可直接用于敏感的下游應用。miRNeasy操作流程將鹽或苯酚污染的可能性降到最低，這些污染可能影響后續(xù)分析。

Principle

目前miRNA研究中最令人興奮的領域之一就是對血清或血漿樣本中存在的miRNA進行檢測。在血清和血漿中存在的相對穩(wěn)定的胞外miRNA引起了極大興趣，因為miRNA水平變化可作為潛在的多種疾病的無創(chuàng)性生物標志物。通過從血清或血漿純化RNA，發(fā)現(xiàn)某些癌癥出現(xiàn)幾種miRNAs的獨特表達。miRNeasy Serum/Plasma Kit可從小體積血漿或血清中純化RNA。血清和血漿中的RNA通常由小于100個核苷酸的分子組成。純化的RNA可使用miScript PCR System進行生物標志物研究。

miRNeasy Serum/Plasma Kit整合了基于苯酚/胍的樣本裂解方法和基于硅膠膜的總RNA純化方法。試劑盒中包括的QIAzol Lysis Reagent是苯酚和異硫氰酸胍的單相溶液，便于裂解組織，抑制RNases，并去除大部分有機抽提裂解液中的胞內DNA和蛋白。

標準化內參的使用

在血清或血漿樣本中miRNA表達譜使用什么作為內參，目前在研究學者間還沒有明確共識。很多研究者選擇將合成的miRNA導入RNA樣品中，以幫助監(jiān)測RNA回收率和反轉效率。QIAGEN推薦miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control作為血清或血漿miRNA表達譜的內參。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control是C. elegans miR-39 miRNA類似物，使用miScript PCR System配合Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay（miRNeasy Serum/Plasma Kit中提供）通過RT-PCR可輕松檢測。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control需單獨訂購。試劑盒中提供的Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay需與miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control配合使用。獲取更多細節(jié)，可參考miRNeasy Serum/Plasma Handbook。

Procedure

血清和血漿樣本溶于QIAzol Lysis Reagent中。加入氯仿后，裂解液離心后分成水相和有機相。RNA位于上層水相，DNA位于中間相，蛋白位于下層有機相或中間相。

提取上層水相后，加入乙醇以提供RNA結合的合適條件，RNA分子大于18個核苷酸。樣品再加入RNeasy MinElute離心柱，總RNA結合到膜上，苯酚和其他污染物被有效洗去。高品質RNA在小體積不含RNase水中洗脫。

血清和血漿中主要含有小RNAs，因此無需分開純化小RNA和大RNA組分。

使用miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control進行標準化

使用miRNeasy Serum/Plasma Kit純化miRNA時，加入QIAzol Lysis Reagent后，在加入氯仿分相前，向樣本中加入miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control。real-time RT-PCR后，合成miRNA的CT值可對樣本進行標準化，可作為不同RNA純化產量和擴增效率的對照。此外，通過與合成miRNA的標準曲線CT值比較，可評估RNA的回收，因為合成miRNA與RNA純化流程無關。

在QIAcube全自動核酸純化儀上進行miRNA自動純化

在QIAcube全自動核酸純化儀上可完全自動純化包括miRNA的總RNA。新型QIAcube全自動核酸純化儀采用先進技術處理QIAGEN離心柱，將自動化、低通量樣品制備無縫整合到實驗室工作流程中。使用QIAcube全自動核酸純化儀的樣品制備流程與手工操作相同（如裂解、結合、洗滌和洗脫），可使用miRNeasy Serum/Plasma Kit進一步純化高品質RNA。

Applications

miRNeasy Serum/Plasma Kit可純化包括miRNA的總RNA，用于多種應用，包括：

生物標志物研究

Northern印跡分析

使用miScript PCR System進行定量real-time RT-PCR

微陣列分析