淚液粘蛋白檢測試劑盒
Tear Mucin Assay kit
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淚液粘蛋白檢測試劑盒
Tear Mucin Assay kit
本試劑盒的原理是在堿性條件下，O-聚糖通過β氫脫離反應從核心蛋白中脫離的同時，在糖鏈還原末端標記熒光，根據熒光強度檢測淚液中的粘蛋白含量。
◆背景
粘蛋白是淚液和眼表上皮頂端細胞膜的主要組分，由O-糖鏈結合核心蛋白而成。其中，核心蛋白是由10-80氨基酸殘基，通過高度O-糖基化的絲氨酸和蘇氨酸殘基串聯(lián)重復結構域而組成。，而具有親水性質的O-聚糖占粘蛋白重量的一半以上（圖1）。重糖基化的粘蛋白具有高負電荷和親水性，該特性具有阻止病原體粘附或穿透進入上皮的功能（圖2）。干眼病患者眼表面粘蛋白及其分泌均發(fā)生改變（圖2）。在眼表上皮，存在三種類型的粘蛋白，由結膜杯狀細胞表達的大凝膠形成的粘蛋白MUC5AC，一些來自淚腺腺泡的細胞表達小溶性粘蛋白MUC7，角膜和結膜上皮細胞表達膜相關粘蛋白MUC1,4和16（圖2）。
圖1 粘蛋白的構造
圖2 圍繞在角膜表面的粘蛋白表達以及淚液粘蛋白的屏障功能
圖3 淚液粘蛋白的防護機能
淚液中粘蛋白的減少被認為是干眼癥的病因。淚液中的粘蛋白可大致分為兩大類，分別是分泌型粘蛋白以及膜型粘蛋白（圖2）。分泌型粘蛋白包括MUC5AC（由結膜杯狀細胞分泌）、MUC7（由淚腺分泌）；膜型粘蛋白包括MUC1、MUC4、MUC16（存在于角膜上皮的細胞膜上）等。
◆特點
● 本試劑盒的原理是在堿性條件下，O-聚糖通過β氫脫離反應從核心蛋白中脫離的同時，在糖鏈還原末端標記熒光，根據熒光強度檢測
淚液中的粘蛋白含量。
● 使用檢測淚液量的淚液分泌試紙可檢測淚液中粘蛋白的含量。
● 可用于針對干眼癥等眼部問題的藥物及保健食品的研發(fā)以及眼科相關研究。
◆試劑盒組成
|
NO. |
組成 |
規(guī)格 |
數量 |
貯存溫度 |
|
1 |
提取液 |
30 mL |
１ |
4～10℃ |
|
2 |
凝膠過濾載體 |
45 mL |
１ |
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3 |
標準液 （100 μg/mL N-乙酰） |
1.0 mL |
１ |
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4 |
試劑 A |
0.3 mL |
１ |
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5 |
試劑 B |
1.5 mL |
１ |
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6 |
反應停止液 |
15 mL |
１ |
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7 |
空柱 |
1 mL用 |
５０ |
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8 |
離心管 |
－ |
５０ |
該試劑盒包含檢測數目淚液黏蛋白所有組件
◆應用
用于測定淚液中粘蛋白含量。
◆測定原理
粘蛋白屬于高分子（1000 kda-10000 kda）重糖基化蛋白家族，主要由富含蘇氨酸與絲氨酸的核心蛋白組成。糖鏈N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）的還原末端與翻譯后的O-糖基化氨基酸連接（圖1）。在堿性條件下，O-聚糖通過β氫脫離反應從核心蛋白中脫離的同時，在高溫下糖鏈還原末端與2-氰基乙酰胺（2-CAN）反應產生強烈熒光縮合物，根據熒光強度檢測淚液中的粘蛋白含量。
◆檢測步驟
● 本產品專為熒光（96孔板）測量而設計。
● 使用熒光讀板機可以測量100個樣品。
● 使用分光光度計測量時，請使用微細胞。
樣品制備
● 使用Schirmer氏淚液分泌條收集淚液5分鐘。
● 儲存淚液分泌條收集的淚液時，請放入微量試管中，并在4℃保存，同時避免凍結。
淚液粘蛋白的測定
1、將淚液分泌條轉移至微量試管中，加入 200 μL 緩沖液洗脫，并在室溫下提取粘蛋白１小時。
2、在步驟１的１小時內，準備空柱，并將空柱放入離心管中。攪拌凝膠漿液至均勻后，將 800 μL 凝膠漿液加入到空柱中，并在室溫下以 800×g
離心 10 分鐘，（推薦使用具有擺動轉子系統(tǒng)的離心機。）去除管中底部液體。
3、將步驟１用淚液分泌條提取的 50 μL 粘蛋白加入到步驟２凝膠的上部。
4、在室溫下以 800×g 離心加有樣品的柱子 10 分鐘，并收集過濾的樣品組分（約50 μL）。
5、將每次通過的組分（4）或標準溶液（①~⑧）的 20 μL 轉移到另一個微量試管（500 μL）中。在試管中加入 24 μL 混合試劑（使用前，
將試劑Ａ和試劑Ｂ以 1：5 的體積混合）?；旌虾螅瑢⒃嚬芗訜嶂?00℃ 30分鐘。
6、將試管冷卻至室溫后，加入 200 μL 終止溶液，并用渦旋混合器混勻。
7、將100 μL溶液放入96孔黑色孔板中，設置波長（熒光：336 nm，發(fā)射：383 nm）后用熒光讀板機測量。
8、按照如下稀釋濃度創(chuàng)建標準曲線。
構建校準曲線，并從標準曲線中讀取樣品濃度。
標準曲線：
參考數據：
建議測量 Ex 時使用 336 nm 波長，測量 Em 時使用 383 nm，但使用具有干涉濾光片系統(tǒng)的熒光板作為前導時，可能無法測量熒光波長，這種情況下，需將熒光波長調到較長數值。
相關產品信息請點擊：粘蛋白檢測試劑盒
參考文獻
| [1] |
Gipson IK, Hori Y, Argüeso P. Character of ocular surface mucins and their alteration in dry eye disease.(2004)Ocul Surf., Apr;2(2):131-48 |
| [2] |
Argüeso P, Balaram M, Spurr-Michaud S, Keutmann HT, Dana MR, Gipson IKGipson IK et al., Decreased levels of the goblet cell mucin MUC5AC in tears of patients with Sj?gren syndrome. (2002) Invest Ophthalmol Vis Sci, April; 43(4): 1004-11 |
| [3] |
Uchino Y, Uchino M, Yokoi N, Dogru M, Kawashima M, Okada N, Inaba T, Tamaki S, Komuro A, Sonomura Y, Kato H, Argüeso P, Kinoshita S, Tsubota, Alteration of tear mucin 5AC in office workers using visual display terminals: The Osaka Study. (2014) JAMA Ophthalmol., Aug;132(8):985-92 |
| [4] |
natomi T, Spurr-Michaud S, Tisdale AS, Zhan Q, Feldman ST, Gipson IK. Expression of secretory mucin genes by human conjunctival epithelia. (1996) Invest Ophthalmol Vis Sci., Aug;132(8):985-92 |
| [5] |
Susumu Honda, Yoshikazu Matsuda, Masaye Takahashi, and Kazuaki Kakehi Fluorimetric Determination of Reducing Carbohydrates with2-Cyanoacetamide and Application to Automated Analysis of Carbohydrates as Borate Complexes. (1980) Analytica Chimica, Vol. 52, No. 7 |
| [6] |
Crowther RS, Wetmore RF: Fluorometric assay of O-linked glycoproteins by reaction with 2-cyanoacetamide. Anal Biochem 163: 170-174, 1987. |
| [7] |
Okazaki Y, Han Y, Kayahara M, Watanabe T, Arishige H, Kato N. Consumption of curcumin elevates fecal immunoglobulin A, an index of intestinal immune function, in rats fed a high-fat diet. J Nutr Sci Vitaminol (2010); 56(1): 68-71. |
| [8] |
Yukako Okazaki, Hiroyuki Tomotake, Kazuhisa Tsujimoto, Masahiro Sasaki,and Norihisa Kato. Consumption of a Resistant Protein, Sericin, Elevates Fecal Immunoglobulin A, Mucins, and Cecal Organic Acids in Rats Fed a High-Fat Diet. (2011) The Journal of Nutrition , 21, 10.3945/ jn.111.144246. |
| [9] |
Zaki Utama & Yukako Okazaki & Hiroyuki Tomotake & Norihisa Kato, Tempe Consumption Modulates Fecal Secondary Bile Acids, Mucins, Immunoglobulin A, Enzyme Activities, and Cecal Microflora and Organic Acids in Rats. Plant Foods Hum Nutr (2013) 68: 177–183 |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規(guī)格 | 產品等級 | 備注 |
| MUC01 | ?Tear?Mucin?Assay?Kit?(O-Glycan?Assay?Method | 1?KIT [50TEST]? |
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