3%組織/細(xì)胞固定液品牌:JinPan | 貨號:JP-8098-500ml
3% Tissue Fixer 3%PFA
【保存條件】
-20℃避光保存,有效期 1 年;4℃避光儲存,有效期 3 個月。
【概述】
固定液可使細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)凝固,終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng),防止組織自溶或異 溶,以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài)。對免疫組化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或彌 散。固定液種類很多,常見的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。 多聚甲醛固定液是一種廣泛用于免疫組化(IHC)、免疫熒光( IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(IC)、流 式分析(FACS)等檢測時組織、組織切片、細(xì)胞等生物樣品固定的溶液。 本產(chǎn)品為 3% 多聚甲醛 PBS 溶液(3% PFA),主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成, 該固定液適合于絕大多數(shù)組織和細(xì)胞的固定,是免疫組織化學(xué)和培養(yǎng)細(xì)胞的固定液之一,它 能較好的保護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及核酸。其固定效果好、應(yīng)用廣,適用于各種常見細(xì) 胞或組織的固定,對皮膚、肌肉、內(nèi)臟等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白質(zhì),無法 固定尿酸和糖類等。 若需使用低濃度多聚甲醛,可使用 PBS 按比例稀釋。
【使用建議】
對于細(xì)胞樣品,去除培養(yǎng)液后,按照每六孔板一個孔加入 1 毫升固定液的比例,加入 3%多 聚甲醛固定液。對于細(xì)胞涂片等其它細(xì)胞樣品,加入固定液的量以充分蓋住樣品為準(zhǔn)。通常 室溫固定 10-20 分鐘即可,但固定較長時間,例如 1-2 小時也是可以的。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)? 洗滌液充分洗滌以去除殘留的多聚甲醛。
對于組織切片,加入 3% 多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準(zhǔn),或使用染色架進(jìn)行固定。 通常室溫固定 10-20 分鐘即可完成固定,但切片較厚時可以固定較長時間,例如 1-2 小時。 后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?nbsp;
對于組織塊樣品,浸泡入 3% 多聚甲醛固定液中,室溫或 4℃浸泡固定 2 到 24 小時。建議不超過 8 小時,除非組織塊特別大,難以滲透。固定完成后,放入裝有蒸餾水的離心管中清 洗,每 15-30 分鐘換一次水,共 6-8 次,建議在搖床進(jìn)行,或用流水沖洗 1-2 小時。隨后梯 度脫水,進(jìn)行包埋。如果暫時不包埋可放入 70-75%的酒精中保存。 如將組織樣品置于 3% 多聚甲醛固定液中浸泡儲存,請避光放置。
【注意事項】
1. 僅限于科研使用,不可用于各種食品藥品或臨床治療中。
2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液 pH 降低,從而影響染色。
4. 不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊 的大小來調(diào)整固定時間。
5. 多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。 因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
6. 多聚甲醛可長期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_ 洗數(shù)小時仍會有殘留,因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。
7. 多聚甲醛固定液固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進(jìn)行 修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
8. 醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子 間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造 成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免 疫組化檢測時,有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
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