2×SDS-PAGE雙色蛋白Loading buffer（DTT）品牌：JinPan | 貨號(hào)：JP-8152-1ml
2×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液（DTT）使用說明書
【包裝規(guī)格】
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產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
包裝 |
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JP-8152 |
SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,2×(with DTT) |
1ml/10ml/100ml |
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使用說明書 |
1份 |
【保存條件】
建議分裝凍存，避免反復(fù)凍融，-20℃，有效期1年
【概述】
2×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護(hù)蛋白質(zhì)在樣品制備步驟中免受熱降解，并在SDS-PAGE運(yùn)行期間防止pH值變化。一些蛋白質(zhì)對(duì)在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動(dòng)引起的pH變化敏感，優(yōu)化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質(zhì)降解。SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時(shí)蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋，消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。
上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料：藍(lán)色（溴酚藍(lán)），用于跟蹤電泳的進(jìn)度；粉紅色（pyronin Y），用于在Western印跡過程中監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)向膜的轉(zhuǎn)移。
【使用建議】
1. 室溫解凍2×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液。
2. 請(qǐng)按每10μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(兩倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高，可用雙蒸水稀釋。
3. 混勻后，100℃水浴加熱5-10分鐘，使蛋白變性。
4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm離心2-5分鐘，取上清直接上樣電泳即可。
【注意事項(xiàng)】
1. DTT對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
2. 為了您的安全與健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時(shí)溴酚藍(lán)指示條帶的位置大概在30kd左右， 膠濃度為12%時(shí)，約在20kd左右，膠濃度為15%時(shí)，大概在10kd。請(qǐng)根據(jù)自己目標(biāo)條帶來判斷結(jié)果電泳時(shí)間。
4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)、吡羅紅指示劑，PH值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態(tài)下，溶液可能會(huì)呈現(xiàn)深棕色，不影響產(chǎn)品使用。
5. 一般而言，吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍(lán)。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠（例如15%）中，吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍(lán)慢。
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