伊文思藍(lán)染色液（0.5%）品牌：JinPan | 貨號(hào)：JP-8435-100ml

Evans Blue Stain Solution 0.5%

【保存條件】 

室溫保存，有效期 1 年 

【概述】 

伊文思藍(lán)(Evans Blue)又稱偶氮藍(lán)，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量為 960.80，CAS 號(hào)為 314-13-6。伊文思藍(lán)屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小和血漿白蛋白相近， 而且在血液中和血漿白蛋白有很高的親和力，因此在神經(jīng)科學(xué)研究中常被用于示蹤觀察血腦 屏障(BBB)的完整性，也用于細(xì)胞染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，亦可測(cè)定血容量。 

伊文思藍(lán)和臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。活 細(xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色。伊文思藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù) 或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量，其中 0.5%為最常用的 濃度。活細(xì)胞因有外排功能而無法被伊文思藍(lán)染色，因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死 細(xì)胞和活細(xì)胞，但無法區(qū)分死亡和壞死。 

【使用建議】 

(一)血腦屏障通透性 

1. 取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain Solution(0.5%)數(shù)秒至 1 分鐘， 小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2. 腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，離心。 

3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育 18～24h。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上 清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4. 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。 5. 取上述溶液 1～2ml，用分光光度計(jì)測(cè) 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時(shí)測(cè)定已知不同梯度的 標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)待測(cè)樣品的依文思藍(lán)含 量。 

(二)活細(xì)胞染色 

1、取 100μl 重懸細(xì)胞到常規(guī) 1.5ml 或 0.5ml 離心管內(nèi)，加入 100μl 伊文思藍(lán)染液輕輕混勻， 染色 3min(染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，但不宜超過 10min)。 

2、吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量， 每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下: 細(xì)胞存 活率＝(細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)×100% 

【注意事項(xiàng)】 

1. 伊文思藍(lán)對(duì)人體有輕微毒性，請(qǐng)小心防護(hù)。 

2. 細(xì)胞染色時(shí)，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。 

3. 血腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)中，伊文思藍(lán)染色液注射量應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調(diào)整。 

4. 最好采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。 

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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