RNAEx ZOL總RNA提取試劑100ml（同Thermo的Trizol）品牌：JinPan | 貨號：EK-5301-100ml
RNAEx ZOL Reagent
貨號：EK-5301
中文名稱：RNAEx ZOL RNA提取試劑（同Thermo的Trizol）
規(guī)格：200ML
應(yīng)用：RNA提取
運輸條件：常溫運輸
【保存條件】
4oC 避光保存一年
【概述】
RNAEx ZOL Reagent 是即用型細胞和組織總 RNA 提取試劑，該試劑是一步法苯酚和異硫氰酸胍解決方案。該試劑可保持樣品 RNA 的完整性，同時破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分享成水相和有機相。RNA 存于水相，通過異丙醇沉淀回收。
此方法可完美應(yīng)用于少量人類、動物、植物或細菌來源的組織和細胞，允許大量樣本同時處理。整個過程可在一小時內(nèi)完成，同時可避免蛋白質(zhì)和 DNA 污染。
【操作方法】
1. 樣品處理：
a. 組織：將組織在液氮中研磨，磨碎后及時于每 50-100mg 組織中加入 1ml RNAEx ZOL Reagent，樣品體積不應(yīng)超過 RNAEx ZOL Reagent 體積的 10%（或使用勻漿儀器）。
b. 單層細胞：直接在培養(yǎng)皿中裂解細胞，如35mm直徑的培養(yǎng)皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，使用吸頭吹勻促進細胞裂解。RNAEx ZOL Reagent 的試劑量基于培養(yǎng)的表面積而不是細胞數(shù)量（每 1cm2加入 1ml RNAEx ZOL Reagent）, RNAEx ZOL Reagent試劑量不足可能會導(dǎo)致分離出的 RNA 有 DNA 污染。
c. 懸浮細胞：先低速離心沉淀細胞，棄培養(yǎng)液后加入 RNAEx ZOL Reagen（t 1ml RNAExZOL Reagent 加入至 5×106動物、植物、酵母或細菌細胞中）。加入 RNAEx ZOL Reagent 前避免洗滌細胞，這容易導(dǎo)致 mRNA 降解。一些酵母和細菌細胞的裂解可能需要使用均質(zhì)器。
可選：一些樣品可能需要額外的分享步驟，這些樣品蛋白質(zhì)、脂肪、多糖或細胞外基質(zhì)含量高，如肌肉、脂肪組織、以及部分植物塊莖。在根據(jù)上述方式處理后，于2-8°C，12000g 離心 10 分鐘，移除沉淀不溶物，RNA 存于上清中。
2. 相分離
a. 將加完 RNAEx ZOL Reagent 后的樣品在室溫（15-30°C）靜置 5 分鐘，以利于樣品核蛋白體完全分離
b. 按每 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.2ml 氯仿（自備），小心蓋好樣品管后，劇烈震蕩 15 秒，后置于室溫（15-30°C）靜置 2-3 分鐘。
c. 2-8°C，10000g 離心 15 分鐘。離心后，混合物分離為下層（酚-氯仿相）、中間相以及上層無色水相。RNA 存在于上層無色水相中，體積約為最初加入 RNAEx ZOL Reagent 體積的 60%左右。
RNA 分離提取步驟：
1. RNA 沉淀
a. 將上述水相轉(zhuǎn)移到一個新的管中，并保存有機相（若希望分離 DNA 或蛋白質(zhì)）?；旌袭惐紡乃嘀谐恋?RNA，每 1ml 用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 使用 0.5ml 異丙醇，室溫（15-30°C）靜置 10 分鐘。
b. 2-8°C，10000g 離心 10 分鐘。離心前看不出 RNA 沉淀，離心后在管側(cè)和管底會出現(xiàn)膠狀沉淀即為 RNA 沉淀。
2. RNA 洗滌
a. 棄上清。用 75%乙醇洗滌 RNA 沉淀一次，每毫升用于初始裂解的 RNAEx ZOL Reagent 試劑使用至少 1ml 75%乙醇，渦旋混勻后于 2-8°C，不超過 7500g 離心 5 分鐘，棄上清
3. 溶解 RNA
a. 在上述過程結(jié)束后，簡單干燥 RNA 沉淀（空氣干燥或真空干燥 5-10 分鐘，不要真空離心離心干燥 RNA）。重要的是不要讓 RNA 沉淀過于干燥，這將大大降低其溶解度。加入 25-200μl 無 RNase 水或 0.5% SDS，用吸頭吹打幾次至溶解，于 50-60°C 放置 10 分鐘使 RNA 徹底溶解（注：若后續(xù)進行酶學(xué)實驗，請勿使用 0.5% SDS 溶液溶
解）。溶解后置于-80°C 保存。
DNA 分離提取步驟：
1. DNA 沉淀
a. 樣品加入氯仿分層后，移去上層水相提取 RNA，吸取中間層和有機層的 DNA 用乙醇沉淀。每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 0.3ml 無水乙醇混勻，室溫靜置 2-3 分鐘，2-8°C 不超過 2000g 離心 5 分鐘以沉淀 DNA。
2. DNA 洗滌
a. 移去苯酚-乙醇上清液（如需要，保存上清用于蛋白質(zhì)分離，操作見下）。用 0.1M 的檸檬酸鈉溶液（溶于 10%乙醇的檸檬酸鈉溶液）清洗沉淀的 DNA。每毫升用于初始的 RNAEx ZOL Reagent 試劑添加 1ml 溶液。每次清洗時，室溫靜置 30 分鐘 DNA沉淀（間歇混勻），2-8°C 2000g 離心 5 分鐘，棄上清。重復(fù)一次。
b. 用 75%乙醇再洗一遍 DNA 沉淀，每使用 1ml RNAEx ZOL Reagent 加入 1.5-2ml 75%乙醇，室溫放置 10-20 分鐘（間歇混勻），2-8°C 2000g 離心 5 分鐘，棄上清。
c. 室溫放置晾干 DNA 5-15 分鐘，用 8mM NaOH 溶解 DNA。從 50-70mg 組織或 107細胞中分離的 DNA 溶于 300-600μl 8mM 的 NaOH 溶液中，濃度常為 0.2-0.3μg/μl。
注：提取的 DNA 沉淀不易溶于水和 Tris 緩沖液中，建議用弱堿溶解，8mM NaOH 的 pH值為 9，NaOH 溶液溶解后可用 TE、HEPES 調(diào)節(jié) PH。從某些樣品（尤其是組織）中提取的 DNA 中可能包含一些膠狀不溶物可用>12000g 離心 10 分鐘除去。
蛋白質(zhì)分離操作步驟：
1. 蛋白質(zhì)沉淀
a. 苯酚-乙醇上清液（每 1ml RNAEx ZOL Reagent 試劑上清體積約 0.8ml）中加入異丙醇可沉淀出蛋白質(zhì)。每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 試劑中添加 1.5ml 異丙醇，室溫靜置 10 分鐘，然后 2-8°C 12000g 離心 10 分鐘以沉淀蛋白質(zhì)，棄上清。
2. 蛋白質(zhì)洗滌
a. 用 0.3M 鹽酸胍溶液（溶于 95%乙醇）洗滌蛋白質(zhì)沉淀 3 次。每毫升每毫升用于初始裂解 RNAEx ZOL Reagent 試劑中添加 2ml 0.3M 鹽酸胍溶液。每次洗滌中，室溫靜置 20 分鐘，2-8°C 7500g 離心 5 分鐘，棄上清，重復(fù) 3 次。最后清洗后，加入 2ml 無水乙醇，漩渦混勻蛋白沉淀，室溫靜置 20 分鐘，然后 2-8°C 7500g 離心 5 分鐘以沉淀蛋白質(zhì)，棄上清。
3. 蛋白質(zhì)溶解
a. 干空干燥蛋白質(zhì)沉淀 5-10 分鐘，用 1% SDS 溶解蛋白質(zhì)，反復(fù)吹打，50°C 溫浴至完全溶解，不溶物 2-8°C 10000g 離心 10 分鐘去除。分離得到的蛋白質(zhì)樣品可用于WesternBlot 或者-20°C 保存（長期保存建議-80°C）
1. RNA 酶污染注意事項：
a. 提取過程用品均經(jīng)過去 RNA 酶處理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小時 ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水沖洗并高壓滅菌，吸頭及離心管類盡量使用一次性無酶吸頭及離心管
b. 佩戴手套及口罩及護目鏡：皮膚上常含有細菌和霉菌，可污染 RNA 制備，且同時是RNA 酶來源，同時 RNAEx ZOL Reagent 對皮膚有一定毒性，建議佩戴手套及口罩及護目鏡。
c. 盡量于通風櫥內(nèi)提取：避免吸入提取過程中有毒物質(zhì)。
2. 安全性問題：
a. 本品在與皮膚接觸及吞咽有毒性，可導(dǎo)致燒傷。與皮膚接觸后，應(yīng)立即用洗滌劑和大量水沖洗。如感到身體不適，應(yīng)立即就醫(yī)
3. 存儲性問題：
a. 實驗已證明 RNAEx ZOL Reagent 室溫下可穩(wěn)定保存 12 個月，不過依然建議儲存于2-8°C 以保證最佳性能，盡量避光保存。
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