GO3000 HiTrans轉(zhuǎn)染試劑1ml品牌：JinPan | 貨號：EK-5401-1ml
GO3000 HiTrans Reagent
【保存條件】
-20oC 保存 2 年
【概述】
1. Ecotop 品牌高效轉(zhuǎn)染試劑（GO3000 HiTrans Reagent），適用于真核哺乳動物細胞轉(zhuǎn)染，有毒性低、轉(zhuǎn)
染效率高等特點。
2. 適用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela 等哺乳動物細胞，轉(zhuǎn)染效率可高達 90%以上。通常 293 細胞轉(zhuǎn)
染效率可以高達 90%以上。大多數(shù)常見的細胞例如 Hela 細胞、CHO 細胞等也都適合用該試劑轉(zhuǎn)染，
但效率比 293 細胞要略低一些。
3. 應(yīng)用：細胞瞬時轉(zhuǎn)染、慢病毒包裝、腺病毒包裝、AAV 病毒包裝、逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝
4. 本試劑經(jīng)過 0.22μm 過濾器除菌處理，可直接使用。
【操作方法】
1. 對于貼壁細胞（以下均以 6 孔板為例，其它培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板請根據(jù)相應(yīng)面積換算）：
a. 將細胞培養(yǎng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板內(nèi)，通常在鋪板后 1-2 天內(nèi)長到 70-90%。
b. 在轉(zhuǎn)染前 1-2 小時，吸去細胞培養(yǎng)液，更換為新鮮的不含抗生素的完全培養(yǎng)液 2ml。
c. 取 2-4μg 待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒 DNA (質(zhì)?？傮w積不宜超過 20μl，若有多種質(zhì)粒請混勻)，以質(zhì)量體積比 1：3 加
入轉(zhuǎn)染試劑 6~12μl（如 2μg 待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒 DNA 加入轉(zhuǎn)染試劑 6μl）。
d. 混勻后，室溫孵育 3-5 分鐘。
e. 把 DNA-轉(zhuǎn)染試劑混合物中加入 500μl opti-MEM（若無 opti-MEM 可使用無血清無雙抗的 DMEM 或 1640，
具體根據(jù)轉(zhuǎn)染細胞使用的培養(yǎng)基）,充分混勻后靜置 10-15 分鐘。
f. 后均勻滴加到整個 6 孔板內(nèi)（加入前吸出原培養(yǎng)板中 500μl 培養(yǎng)基），并置于含 5%二氧化碳的 37oC 細胞
培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
g. 在轉(zhuǎn)染后 4-6 小時左右換液，更換為 2ml 新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
h. 通常在轉(zhuǎn)染約 24-48 小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達。
2. 對于懸浮細胞：www.ecotopbio.com
a. 離心收集懸浮細胞，用 PBS 洗滌一次。
b. 按照上面的步驟 c)、d)、e）制備 DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM 混合物。
c. 每 106 個細胞的沉淀，用 500 微升 DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM 混合物重新懸浮，室溫放置 15-20 分鐘。
d. 在一個 6 孔板孔內(nèi)加入 1.5ml 完全培養(yǎng)液，然后加入來自上一步的細胞-500 微升 DNA-轉(zhuǎn)染試劑-optiMEM
混合物，混勻。
e. 在含 5%二氧化碳的 37oC 細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
f. 根據(jù)實驗要求和轉(zhuǎn)染試劑對于不同細胞的毒性不同，在 4-6 小時后離心收集細胞，用 PBS 洗一次，然后
用 2 毫升完全培養(yǎng) 液重新懸浮細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。
g. 通常在轉(zhuǎn)染約 24-48 小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達。
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