細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒100T品牌：JinPan | 貨號(hào)：EK-6100-100T
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
【保存條件】
-20℃保存一年 【使用建議（僅供參考）】
1. 準(zhǔn)備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當(dāng)量的細(xì) 胞漿蛋白抽提試劑 CE I/II 及細(xì)胞核蛋白抽提試劑 NE 備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶 抑制劑混合物及 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
A: 對(duì)于貼壁細(xì)胞：用 PBS 洗一遍，用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，或用 EDTA 溶液處理細(xì)胞使細(xì)胞 不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細(xì)胞。離心收集細(xì)胞，盡最大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉 淀備用。（注：盡量避免用胰酶消化細(xì)胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。）
B: 對(duì)于懸浮細(xì)胞：用預(yù)冷的 PBS 清洗一遍，離心收集細(xì)胞，盡最大努力吸盡上清，留下細(xì) 胞沉淀備用。 2. 每 20 微升細(xì)胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑 CE I。（對(duì)于 200 萬(wàn) HeLa 細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。)
2. 每 20 微升細(xì)胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑 CE I。（對(duì)于 200 萬(wàn) HeLa 細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。)
3. 最高速劇烈渦旋 5-10 秒，把細(xì)胞沉淀完全懸浮并分散開(kāi)。(如果細(xì)胞沉淀沒(méi)有完全懸浮并分散開(kāi)，可以適當(dāng)延長(zhǎng) vortex 時(shí)間。)
4. 冰浴 10-15 分鐘。（過(guò)程中可適當(dāng)渦旋 2-3 次）
5. 4℃下 3000rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 分鐘。
6. 收集上清液（上清為細(xì)胞質(zhì)提取物，儲(chǔ)存在-80℃或準(zhǔn)備加入 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中。注意此時(shí)沉淀并不致密）
7. 將步驟 6 中沉淀重懸于 100 微升細(xì)胞漿蛋白抽提試劑 CE II 中。
8. 4℃下 3000rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 分鐘，除去上清液（剩余沉淀為細(xì)胞核）。若想更好的清洗細(xì)胞核，可重復(fù)步驟 7 和步驟 8 一次。
9. 向此沉淀物中添加等體積的細(xì)胞核蛋白抽提試劑 NE（即，如果沉淀為 40 μL，則添加 40μL NE）
10. 將沉淀重懸并在冰上孵育 10 分鐘（過(guò)程中可適當(dāng)渦旋 3-5 次）。
11. 在 4℃下以 14,000 rpm 離心 5 分鐘。
12. 收獲上清液（這是核提取物）。
13. 將提取物儲(chǔ)存在-80℃或準(zhǔn)備加入 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中。
【注意事項(xiàng)】
1. 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免效率下降。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作
本網(wǎng)站可提供的所有產(chǎn)品和服務(wù)均不得用于人體或動(dòng)物的臨床診斷或治療，僅可用于科研等非醫(yī)療目的。
