5XSDS-PAGE雙色蛋白Loading buffer（DTT）品牌：JinPan | 貨號：JP-8522-10ml

【保存條件】

 建議分裝凍存，避免反復(fù)凍融，-20℃避光保存，有效期 1 年 

【概述】

 5×SDS-PAGE 雙色蛋白上樣緩沖液可保護(hù)蛋白質(zhì)在樣品制備步驟中免受熱降解，并在 SDS-PAGE 運(yùn)行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質(zhì)對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動引起 的 pH 變化敏感，優(yōu)化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中 以及電泳過程中蛋白質(zhì)降解。SDS 可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電 荷，這時蛋白質(zhì)本身的電荷完全被 SDS 掩蓋，消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異；SDS 還 可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)。DTT 可以斷開半胱 氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu) 上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。 上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料：藍(lán)色（溴酚藍(lán)），用于跟蹤電泳的進(jìn)度；粉紅色（pyronin Y），用于在 Western 印跡過程中監(jiān)測蛋白質(zhì)向膜的轉(zhuǎn)移。 

【使用建議】

 1. 室溫或 37℃水浴解凍 5×SDS-PAGE 雙色蛋白上樣緩沖液，并搖晃混勻。 2. 請按每 40μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(5 倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度 過高，可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后，100℃水浴加熱 5-10 分鐘，使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后，10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘，取上清直接上樣電泳即可

【注意事項(xiàng)】 

1. DTT 對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。 2. 該產(chǎn)品于-20℃保存時會出現(xiàn) SDS 沉淀，使用前請確保溶液完全復(fù)溶混勻，有必要時可 置于 37℃水浴促溶。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)、吡羅紅指示劑，PH 值受保存溫度影響，在低溫凍存狀態(tài) 下，溶液可能會呈現(xiàn)深棕色，不影響產(chǎn)品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時溴酚藍(lán)指示條帶的位置大概在 30kd 左右， 膠濃度為 12% 時，約在 20kd 左右，膠濃度為 15%時，大概在 10kd。請根據(jù)自己目標(biāo)條帶來判斷結(jié)果 電泳時間。 5. 一般而言，吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍(lán)。在較高百分比的 SDS 聚丙烯酰胺凝膠（例如 15%）中，吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍(lán)慢。 6. 為了您的安全與健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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