BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒-200T,常用生化試劑

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BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒-200T品牌：JinPan | 貨號(hào)：EK-5001-200T

BCA Protein Assay Kit

【保存條件】

 BCA 試劑 A 室溫避光保存 1 年 BCA 試劑 B 室溫保存 1 年 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品-20℃保存 1 年

 【概述】

 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之 一 BCA 法研制而成， 實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單、高穩(wěn)定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高，檢測(cè)濃 度下限達(dá)到 25μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.5μg，待測(cè)樣品體積為 1-20μl。在 50-2000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有 較好的線性關(guān)系。 BCA 法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá) 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM，無(wú) EGTA，二硫蘇糖醇(DTT) 低于 1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于 0.01%。不適用 BCA 法時(shí)建議試用本司生產(chǎn)的 Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。 

【操作方法】

 1.配制 BCA 工作液： 依據(jù)樣品數(shù)量，將試劑 A 和試劑 B 按體積比 50:1 配制適量 BCA 工作液，并充分混勻。 注：配制 BCA 工作液前請(qǐng)將試劑 A 搖晃混勻，觀察是否析出結(jié)晶，如若析出結(jié)晶，可 37℃水浴促溶。 2.稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品： 蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，如果蛋白樣品所在溶液不含有 干擾本試劑盒檢測(cè)的物質(zhì)，也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/ml BSA)如果凍存，請(qǐng)完全融化并混勻后使用。具體如下表：

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒-200T

3.蛋白濃度的檢測(cè)
a. 取 5μl 不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)加到 96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中。
b. 取 5μl 樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 5μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 5μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。
c. 各孔加入 195μl BCA 工作液。 37℃放置 30 分鐘。
注:也可以室溫放置 2 小時(shí)，或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)
會(huì)因溫 度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
d. 用酶標(biāo)儀測(cè)定 A595，或 560-610nm 之間的其它波長(zhǎng)的吸光度?？梢粤⒓礈y(cè)定吸光度，也可以在 2小時(shí)內(nèi)測(cè)定，2 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)數(shù)據(jù)無(wú)顯著變化。
4.數(shù)據(jù)計(jì)算
a.以不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液為橫坐標(biāo)
b. 以不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)測(cè)得 OD 值（多孔則為平均 OD）為縱坐標(biāo)
c. 建立線性關(guān)系，獲得公式（如右圖中所示(本產(chǎn)品實(shí)際檢測(cè))，若測(cè)得樣品 OD=0.6 則 0.6=0.4995x+0.4151，計(jì)算得濃度 x=0.37mg/ml）

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒-200T

【注意事項(xiàng)】
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 不同 96 板的吸收值會(huì)有不同，得到 OD 有區(qū)別為正常現(xiàn)象（保證數(shù)據(jù)呈線性關(guān)系）。
3. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（5mg/ml）收到后盡快分裝，避免反復(fù)凍融。
4. BCA 試劑 A 在低溫環(huán)境下會(huì)析出結(jié)晶，可適當(dāng) 37℃水浴促溶后使用。
5. 請(qǐng)使用 96 孔底部透明板（如普通細(xì)胞培養(yǎng)板）檢測(cè)，最佳波長(zhǎng)為 595nm。

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