Bradford蛋白濃度測定試劑盒-1000T品牌：JinPan | 貨號(hào)：EK-5002-1000T
Bradford Protein Assay Kit
【包裝規(guī)格】
【保存條件】
BSA 存于-20℃，其它試劑 4℃保存穩(wěn)定 12 個(gè)月。
【概述】
考馬斯亮蘭 G-250 染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由 465nm 變?yōu)?595nm，在一定的濃度范圍內(nèi)，測定的吸光度值 A595 與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá) 1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá) 5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS 的濃度低于 0.1%，Triton X-100 低于 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。
【使用方法】
1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的準(zhǔn)備
a. 蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，如果蛋白樣品所在溶液不含有干擾本試劑盒檢測的物質(zhì)，也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/ml BSA)如果凍存，請完全融化并混勻后使用。
b. 按照下表配制 0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)。每次稀釋時(shí)注意充分混勻。如果有必要可以增加設(shè)置 0.0625mg/ml 的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
2. 蛋白濃度測定
a. 取 5μl 不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)加到 96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中。
b. 取 5μl 樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 5μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 5μl。請注意記錄樣品體積。
c. 各孔加入 250μl G250 染色液。
d. 用酶標(biāo)儀測定 A595，或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度?？梢粤⒓礈y定吸光度，也可以在 2 小時(shí)內(nèi)測定，2 小時(shí)內(nèi)檢測數(shù)據(jù)無顯著變化。
e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
【注意事項(xiàng)】
1. 本品 BSA 因每次使用量較小，推薦分裝使用。
2. 不同 96 板的吸收值會(huì)有不同，得到 OD 有區(qū)別為正?，F(xiàn)象（保證數(shù)據(jù)呈線性關(guān)系）
3. 請使用 96 孔底部透明板（如普通細(xì)胞培養(yǎng)板）檢測，最佳波長為 595nm。
4. 將 G250 染色液回復(fù)至室溫后使用，有利于提高檢測靈敏度。
5. 為了您的安全與健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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