細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒品牌：JinPan | 貨號：EK-6100-50T
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
【保存條件】
-20℃保存一年 【使用建議（僅供參考）】
1. 準備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當量的細 胞漿蛋白抽提試劑 CE I/II 及細胞核蛋白抽提試劑 NE 備用，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶 抑制劑混合物及 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
A: 對于貼壁細胞：用 PBS 洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用 EDTA 溶液處理細胞使細胞 不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，盡最大努力吸盡上清，留下細胞沉 淀備用。（注：盡量避免用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。）
B: 對于懸浮細胞：用預冷的 PBS 清洗一遍，離心收集細胞，盡最大努力吸盡上清，留下細 胞沉淀備用。 2. 每 20 微升細胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細胞漿蛋白抽提試劑 CE I。（對于 200 萬 HeLa 細胞，其細胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。)
2. 每 20 微升細胞沉淀加入 100 微升添加了 PMSF 和蛋白酶抑制劑的細胞漿蛋白抽提試劑 CE I。（對于 200 萬 HeLa 細胞，其細胞沉淀的體積大約為 20 微升或 40 毫克。)
3. 最高速劇烈渦旋 5-10 秒，把細胞沉淀完全懸浮并分散開。(如果細胞沉淀沒有完全懸浮并分散開，可以適當延長 vortex 時間。)
4. 冰浴 10-15 分鐘。（過程中可適當渦旋 2-3 次）
5. 4℃下 3000rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 分鐘。
6. 收集上清液（上清為細胞質(zhì)提取物，儲存在-80℃或準備加入 Western Blot 實驗中。注意此時沉淀并不致密）
7. 將步驟 6 中沉淀重懸于 100 微升細胞漿蛋白抽提試劑 CE II 中。
8. 4℃下 3000rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 分鐘，除去上清液（剩余沉淀為細胞核）。若想更好的清洗細胞核，可重復步驟 7 和步驟 8 一次。
9. 向此沉淀物中添加等體積的細胞核蛋白抽提試劑 NE（即，如果沉淀為 40 μL，則添加 40μL NE）
10. 將沉淀重懸并在冰上孵育 10 分鐘（過程中可適當渦旋 3-5 次）。
11. 在 4℃下以 14,000 rpm 離心 5 分鐘。
12. 收獲上清液（這是核提取物）。
13. 將提取物儲存在-80℃或準備加入 Western Blot 實驗中。
【注意事項】
1. 盡量減少反復凍融的次數(shù)，以免效率下降。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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