5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(DTT),常用生化試劑

5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(DTT)品牌:JinPan | 貨號:JP-8129-10ml

SDS-PAGE Protein Loading Buffer,5×(with DTT)

【保存條件】
建議分裝凍存,避免反復(fù)凍融,-20℃避光保存,有效期 1 年
【概述】
5×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液可保護(hù)蛋白質(zhì)在樣品制備步驟中免受熱降解,并在
SDS-PAGE 運(yùn)行期間防止 pH 值變化。一些蛋白質(zhì)對在 Tris 緩沖液中電泳期間溫度波動(dòng)引起
的 pH 變化敏感,優(yōu)化后的上樣緩沖液組分可防止在 SDS-PAGE 電泳之前的樣品加熱過程中
以及電泳過程中蛋白質(zhì)降解。SDS 可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電
荷,這時(shí)蛋白質(zhì)本身的電荷完全被 SDS 掩蓋,消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異;SDS 還
可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)。DTT 可以斷開半胱
氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)
上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關(guān)。
溴酚藍(lán)作為指示劑,用于追蹤電泳進(jìn)度。
【使用建議】
1. 室溫或 37℃水浴解凍 5×SDS-PAGE 單色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。
2. 請按每 40μl 蛋白樣品加入 10μl 上樣緩沖液的比例(五倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度
過高,可用雙蒸水稀釋。
3. 混勻后,100℃水浴加熱 5-10 分鐘,使蛋白變性。
4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm 離心 2-5 分鐘,取上清直接上樣電泳即可。
【注意事項(xiàng)】
1. DTT 對人體有害,操作時(shí)請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
2. 該產(chǎn)品于-20℃保存時(shí)會出現(xiàn) SDS 沉淀,使用前請確保溶液完全復(fù)溶混勻,有必要時(shí)可
置于 37℃水浴促溶。
3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)指示劑,PH 值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態(tài)下,溶液
可能會呈現(xiàn)深棕色,不影響產(chǎn)品使用。
4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為 8%時(shí)溴酚藍(lán)指示條帶的位置大概在 30kd 左右, 膠濃度為 12%
時(shí),約在 20kd 左右,膠濃度為 15%時(shí),大概在 10kd。請根據(jù)自己目標(biāo)條帶來判斷結(jié)果
電泳時(shí)間。
5. 為了您的安全與健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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