NewZOL LS 總RNA提取試劑(NewZOL LS Reagent)品牌：JinPan | 貨號(hào)：EK-5303-100ml
功能與使用方法與life品牌的Trizol LS相似
【保存條件】
2-8℃長期保存
【操作方法】
I. 樣本處理
1. 組織樣本處理：用勻漿器或其他類似設(shè)備勻化組織樣本機(jī)械破壞裝置，每 500μL 最多使用 50 mg 組織NewZOL LS。 對(duì)于 DNA 含量高的組織（例如脾臟），建議使用 25 mg 組織/ 500μL 試劑。
2. 貼壁細(xì)胞樣本處理：除去細(xì)胞培養(yǎng)基，通過向培養(yǎng)皿（直徑 3.5 cm，10 cm2）中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通過反復(fù)吸移來確保完全裂解。（根據(jù)培養(yǎng)皿面積而不是細(xì)胞數(shù)計(jì)算試劑量。試劑量不足將導(dǎo)致分離的 RNA 受到 DNA 污染。殘留的勻漿可以在-20 至-80°C 下保存至少一年，以備后用。）
3. 懸浮細(xì)胞樣本處理：沉淀細(xì)胞，并通過添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106個(gè)細(xì)胞至少加入 500μLNewZOL LS，移液器吹打數(shù)次裂解細(xì)胞。（添加 NewZOL LS 之前請(qǐng)勿洗滌細(xì)胞，細(xì)胞洗滌可能會(huì)導(dǎo)致 RNA降解。）
4. 液體樣本處理：每 200μL 液體樣品中加入 500μL NewZOL LS 進(jìn)行均質(zhì)化和裂解。對(duì)于小于 200μL 的樣品體積，請(qǐng)?zhí)砑?500μLNewZOL LS 并加水至最終體積為 700μL。
5. 富含脂質(zhì)樣本處理：如上所述均質(zhì)化富含脂質(zhì)的樣品。將樣品以 12,000×g 離心 5 分鐘。 離心后，樣品頂部會(huì)出現(xiàn)一層脂肪。用移液器吸頭尖端刺穿上層，然后將上清液轉(zhuǎn)移到新管中。
II. RNA 提取
1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 無 RNase 的水至裂解液中。劇烈搖動(dòng)樣品 15 秒鐘。在室溫下孵育 5 分鐘。（對(duì)于包含 50 mg 組織/ 500μL NewZOL LS 的樣品，建議在室溫下孵育 15 分鐘。）
2. 在室溫下以12,000×g離心樣品15分鐘。含有DNA，蛋白質(zhì)和多糖的半固體沉淀物形成在試管底部。RNA仍溶解在上清液中。
3. 將 500μL 上清液轉(zhuǎn)移至新管中。 勿吸太干凈防止污染，在 DNA /蛋白質(zhì)沉淀上方保留一小部分上清液。
（含有 DNA，蛋白質(zhì)和多糖的沉淀物占勻漿-水混合物總量的約 10％。）
4. 加入等體積異丙醇，上下顛倒混勻以沉淀 RNA，在室溫下孵育樣品 10 分鐘。
5. 將樣品以 12,000×g 離心 10 分鐘，除去并丟棄上清液。通常，在管的底部以白色沉淀的形式獲得 RNA。對(duì)于脾臟樣品，RNA 在試管底部形成凝膠狀膜。用乙醇洗滌后，膜變得更可見。
6. 加入 500μL 75％ 乙醇（無 RNase 水配制）洗滌，輕彈管底使沉淀懸浮，上下顛倒混勻。對(duì)于較大的試管，按比例添加 75% 乙醇溶液。
7. 將沉淀以 8,000×g 的速度離心 3 分鐘。移液去除沉淀中的乙醇，重復(fù)乙醇洗滌步驟一次。靜置 5-10 分鐘待乙醇揮發(fā)，無需過份干燥成固體，干燥成固體的 RNA 沉淀不易溶解
8. 將 RNA 沉淀溶于無 RNase 的水中，在室溫下渦旋 3 分鐘，以實(shí)現(xiàn)有效溶解。將得到的 RNA 進(jìn)行檢測(cè)或-65℃長期保存（若需更長時(shí)間保存請(qǐng)?zhí)砑舆m量 RNA Chill（JP-8520））。
【注意事項(xiàng)】
1. RNA 酶污染注意事項(xiàng)：
a. 提取過程用品均經(jīng)過去 RNA 酶處理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小時(shí) ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水沖洗并高壓滅菌，吸頭及離心管類盡量使用一次性無酶吸頭及離心管
b. 佩戴手套及口罩及護(hù)目鏡：皮膚上常含有細(xì)菌和霉菌，可污染 RNA 制備，且同時(shí)是 RNA 酶來源，同時(shí) New ZOL LS 對(duì)皮膚有一定毒性，建議佩戴手套及口罩及護(hù)目鏡。
c. 盡量于通風(fēng)櫥內(nèi)提?。罕苊馕胩崛∵^程中有毒物質(zhì)。
2. 安全性問題：
a. 本品在與皮膚接觸及吞咽有毒性，可導(dǎo)致燒傷。與皮膚接觸后，應(yīng)立即用洗滌劑和大量水沖洗。
如感到身體不適，應(yīng)立即就醫(yī)
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