CCK-8試劑盒(細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒)-10000T品牌：JinPan | 貨號：EK-5103-10000T
Cell Counting Kit-8
【保存條件】
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
【概述】
Cell Counting Kit-8 試劑盒簡稱 CCK-8 試劑盒，可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。該試劑主要用途有：藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)。
【使用方法（僅供參考）】
1. 用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入 100μl 2×103個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 100μl 5×103個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定，推薦進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞數(shù)量)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予 0-10μl 特定的藥物刺激。
2. 每孔加入 10μl CCK-8 溶液（如果起始的培養(yǎng)體積為 200μl，則需加入 20μl CCK-8 溶液，其它情況以此類推）。可以用加了相應(yīng)體積細(xì)胞培養(yǎng)液和 CCK-8 溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8 溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)（37°C）繼續(xù)孵育 0.5-4 小時(shí)，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在 0.5、1、2 和 4 小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 在 450nm 測定吸光度?？梢允褂梦舛仍?430-490nm 之間的濾光片，但是 450 nm 濾光片的檢測靈敏度最高。
5. 計(jì)算方法
細(xì)胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%
抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：實(shí)驗(yàn)孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測物質(zhì))
Ac：對照孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測物質(zhì))
Ab：空白孔(不含細(xì)胞和待測物質(zhì)的培養(yǎng)基、CCK-8)
【注意事項(xiàng)】
1. 初次實(shí)驗(yàn)可選擇 3-5 個(gè)孔進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞數(shù)量。
2. 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
3. 當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會影響 CCK- 8 的測定，增加 OD 值；在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會抑制測定反應(yīng)的發(fā)生，減小 OD 值；在有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可。
4. 在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果藥物具有還原性，就會和 CCK- 8 試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，增加吸光度。解決辦法：首先要確認(rèn)藥物是否有吸收，在含有藥物的培養(yǎng)基中加入 CCK- 8，測定 450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基 (只加 CCK-8) 的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加 CCK- 8 之前更換培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。
5. 如果測定的 OD 值太低可適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或延長加入 CCK-8 溶液后的染色時(shí)間。
6. 用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。
7. 僅用于實(shí)驗(yàn)室，不適合農(nóng)業(yè)/家庭/臨床用途使用。
8. 為了您的安全與健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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