雙通道非洲豬瘟病毒熒光定量 PCR 檢測試劑盒品牌：JinPan | 貨號：EK-9021-50T
African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit
【貯藏與有效期】
-20℃以下保存，有效期為 12 個月。
【主要成分與含量】
【用法與判定】
1. 核酸提取步驟：取拭子或血樣10μl 加入裂解液 10μl 充分混勻后于室溫或 56℃處理10min后再 95℃加熱 5min。取 5μl 上清用于下游檢測擴增。為獲取更優(yōu)結(jié)果，可考慮使用柱法或磁珠法提取試劑盒提取核酸。
2. PCR 操作步驟
2.1 取出試劑盒，將試劑盒置室溫（冰上溶解更優(yōu)）各試劑完全溶解并混勻。
2.2 取需要數(shù)量的 PCR 管，取 20μl PCR 反應(yīng)液至每個反應(yīng)管內(nèi)，然后加 5μl 所提取的樣品核酸，每個反應(yīng)總體積為 25μl。每次檢測應(yīng)設(shè)立陽性對照和陰性對照，在熒光定量 PCR儀上進行擴增檢測。
2.3 將各 PCR 管放置在儀器槽的相應(yīng)位置，并記錄放置順序，按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)，進行 PCR 擴增。
3.結(jié)果判定
3.1 陰性對照：1） FAM 與 VIC 通道均應(yīng)無擴增曲線，偶有翹尾（Ct≥38）屬于正常；
3.2 陽性對照：
1）FAM 通道應(yīng)有擴增曲線，且其 Ct 值<33；FAM 通道 Ct 值≥33 時，檢測試劑或者陽性參考品可能存在問題，應(yīng)重新實驗，此時若樣本孔根據(jù)判讀標(biāo)準(zhǔn)為陽性，結(jié)果為陽性；
2）VIC 通道應(yīng)有擴增曲線且其 Ct 值<32；VIC 通道 Ct 值≥32 時，檢測試劑或者陽性參考品存在問題，應(yīng)重新實驗，此時若樣本孔根據(jù)判讀標(biāo)準(zhǔn)為陽性，結(jié)果為陽性；
3.3 樣本：
1）VIC 通道 Ct 值>36：如 FAM 通到 Ct 值≤38，則結(jié)果為陽性；如 FAM 通到 Ct>38 或者沒有擴增曲線，則樣本投入量過少或者存在 PCR 抑制劑，建議重新取樣；
2）VIC 通道 Ct 值≤36：如 FAM 通到 Ct 值≤38，則結(jié)果為陽性；如 FAM 通到 Ct>38 或者沒有擴增曲線，則結(jié)果為陰性。若被檢樣品 FAM 通道 38
*注：VIC 通道為豬內(nèi)參信號，F(xiàn)AM 為非瘟病毒信號。陽性結(jié)果應(yīng)該是明細擴增曲線，如果應(yīng)該增幅低且擴增曲線不明顯，應(yīng)為非特異性擴增。
【注意事項】
（1）嚴格按照使用說明書進行操作。使用前應(yīng)將各試劑完全溶化，充分振蕩混勻，瞬時離心
應(yīng)盡量吸取液體上層。
（2）試劑盒不同組分間不得交叉，防止污染。
（3）避免反復(fù)凍融。
（4）PCR 產(chǎn)物均應(yīng)合理處理，以免造成污染。
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