血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒品牌：genefist | 貨號(hào)：GF304-03

選配試劑
紅細(xì)胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer 貨號(hào)：GF1201-01）;RNase A (100mg/ml) 貨號(hào)：GF0201-01)

   儲(chǔ)存條件
該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保   存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)  熱10 min，以溶解沉淀。
   產(chǎn)品簡(jiǎn)介及特點(diǎn)
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA   的離心吸附柱，和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附DNA，可有 效去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物,用來提取多種細(xì)胞中的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機(jī)溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。根據(jù)不同的樣本量和樣本類型，可以提取的DNA 產(chǎn)量范圍為 1-40ug。 
使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。 
注意事項(xiàng) 
1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA 片段較小且提取量也下降。
2. 若溶液 GA 或溶液BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 
3. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下離心。
操作步驟 
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。1.處理材料
a. 如提取材料為血液，可直接使用 200μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足 200 μl 可加溶液GA 補(bǔ)足；
注意：如需處理更大體積血液，如 300μl-1 ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細(xì)胞裂解液 （例如，300μl 血液加入 900μl 紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置 5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000 rpm(~11,500×g)離心 1 min（若離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速不允許，可 3000 rpm(~3,400×g)離心5 min），吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀，加 200 μl 溶液 GA，振蕩至徹底混勻。 
紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售（貨號(hào)：GF1201-01），可根據(jù)需要來決定購(gòu)買。 
b. 如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量 5- 20μl，可加溶液 GA 補(bǔ)足 200 μl 后進(jìn)行下面的裂解步驟。
c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000 rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 溶液GA，振蕩至徹底懸浮。
d. 動(dòng)物組織（脾組織用量應(yīng)少 10 mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm(~11,200×g)離心 1 min，倒盡上清，加 200 μl 緩沖液 GA，振蕩至徹底懸浮。
注意：如果需要去除RNA，可加入 4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號(hào)：GF0201-01）， 振蕩 15 sec，室溫放置 5 min。
2. 加入 20μl Proteinase K 溶液，混勻。
 a.提取血液基因組時(shí)，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
 b.提取細(xì)胞基因組時(shí)，加入Proteinase K，混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
 c.提取組織基因組時(shí)，加入 Proteinase K 混勻后，在 56℃放置，直至組織溶解，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。
注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需 1-3 h 即可完成（鼠尾需要消化過夜），每小時(shí)顛倒混合樣品 2-3次，用水浴振蕩器也可。
3. 加入 200ul 溶液 BG，充分顛倒混勻，70℃放置 10 min,溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。注意：加入溶液 BG 時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不純。當(dāng)血液體積≤200μl 且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒有團(tuán)塊等沉淀。
4. 加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。 
5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放回收集管中。 
6. 向吸附柱CG1 中加入 300μl 溶液BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。

注意：這一步驟對(duì)于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。
7. 向吸附柱CG1 中加入700μl 漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CG1 放入收集管中。 
8. 重復(fù)操作步驟 7。
9. 將吸附柱CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、 PCR 等）實(shí)驗(yàn)。
10. 將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。
注意：洗脫液體積不應(yīng)少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O 做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。 

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