D5025

脫氧核糖核酸酶 I 來源于牛胰腺

Type IV, lyophilized powder, ≥2,000Kunitz units/mg protein

別名:

DNase I, 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸-水解酶

屬性

生物來源

bovine pancreas

質(zhì)量水平

300

類型

Type IV

形式

lyophilized powder

specific activity

≥2,000Kunitz units/mg protein

分子量

~31kDa

純化方式

chromatography

組成

Protein, ≥80%

溶解性

0.15 M NaCl: soluble 5.0mg/mL, clear, colorless

application(s)

diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing

異質(zhì)活性

Chymotrypsin ≤0.5%
Protease ≤0.05%
RNase ≤0.02%

運(yùn)輸

wet ice

儲存溫度

20°C

說明

應(yīng)用

DNAse I可用于切開DNA，作為將標(biāo)記堿基插入DNA的第一步。來自sigma的該酶已用于處理大鼠的腦組織。該研究表明星形膠質(zhì)細(xì)胞的軸突生長不受少突膠質(zhì)細(xì)胞抑制。[1]在另一項(xiàng)研究中，大腸桿菌的解凍固定樣本被來自Sigma的DNAseI以及其他酶進(jìn)行消化。消化是在進(jìn)行通透化處理和核酸染色前完成的。[2]

來自牛胰腺的脫氧核糖核酸酶I已用于研究枯草芽孢桿菌中核酸酶的二維酶譜分析。來自牛胰腺的脫氧核糖核酸酶I還用于研究小溝和大溝結(jié)合藥物和嵌入劑對小溝結(jié)合蛋白RecA和脫氧核糖核酸酶I的DNA結(jié)合的影響。

用于從蛋白質(zhì)樣品中除去 DNA。

生化/生理作用

DNase I是一種內(nèi)切核酸酶，可作用于與嘧啶相鄰的磷酸二酯鍵以產(chǎn)生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。當(dāng)Mg2+存在時，DNAse I可獨(dú)立切割DNA的每條鏈且切割位點(diǎn)是隨機(jī)的。當(dāng)Mn2+存在時，兩條DNA鏈都幾乎是在同樣的位置被切割。[3]最適pH在7-8之間。二價陽離子如Mn2+, Ca2+, Co2+以及Zn2+都是酶的激活劑。[4]5 mM濃度的Ca2+可穩(wěn)定酶免收蛋白水解酶的消化。來自牛胰腺的DNAse I由四種色譜可區(qū)分的組分A，B，C和D組成，它們的摩爾比為4:1:1。僅有少量的D被發(fā)現(xiàn)。[5]2-巰基乙醇、螯合劑、十二烷基硫酸鈉（SDS）[6]和肌動蛋白[7]都已知可抑制酶的活性。

單位定義

一Kunitz單位的酶在以I型或III型DNA作為底物時，在 pH 5.0，37°C的條件下在每mL中每分鐘可引起0.001的A260。

外形

含氯化鈣的凍干粉

制備說明

溶液0.15 M NaCl的10 mg/mL DNAse I溶液分裝保存在20 °C一周后可能會丟失<10%的活性。同樣的溶液保存在2-8 °C則可能丟失約20%的活性。當(dāng)在pH 5和7之間時，它可在60 °C維持活性最長達(dá)五小時，并在68 °C <10分鐘內(nèi)丟失活性。它在乙酸緩沖液（pH 5.0）和tris緩沖液((pH 7.2)，1 mg/mL濃度)中以6%/小時的速率丟失活性。 分析說明 蛋白由雙縮脲法測定。