屬性

形式

lyophilized powder

質(zhì)量水平

200

specific activity

≥500CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)

分子量

68-130kDa

純化方式

chromatography

溶解性

TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1mg/mL at37°C

異質(zhì)活性

Clostripain ≤2.0 U/mg

儲存溫度

20°C

說明

一般描述

來自溶組織梭狀芽胞桿菌的膠原酶由膠原酶 G 和 H 組成。膠原酶具有 N 端活化劑結(jié)構(gòu)域和 C 端肽酶結(jié)構(gòu)域。膠原結(jié)合域（CBD）和多囊腎疾病樣（PKD 樣）域位于肽酶域中。[1]膠原酶模塊在與鈣結(jié)合時發(fā)生結(jié)構(gòu)變化。[2]

應(yīng)用

來自溶組織梭狀芽孢桿菌的膠原酶可用于從許多類型的動物組織中分離細(xì)胞。它可用于分解人腫瘤、小鼠腎臟、人成年/胎兒腦、肺和許多其他組織。它也可以用于肝臟和腎臟的灌注研究、胰腺的消化，非實質(zhì)大鼠肝細(xì)胞的分離以及肝細(xì)胞的制備。

來自溶組織梭狀芽孢桿菌的膠原酶可用于：

從膠原蛋白凝膠中回收中性粒細(xì)胞[3]

將乳腺腫瘤活檢組織分散成單細(xì)胞[4]

從子宮內(nèi)膜活檢組織中分離人原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞（HESC）[5]

生化/生理作用

粗膠原酶是溶組織梭狀芽胞桿菌分泌的酶的混合物（主要是蛋白酶）。有效地從組織中釋放細(xì)胞需要膠原酶和中性蛋白酶的共同作用。每摩爾酶用 4 克原子鈣 (Ca2+) 激活膠原酶。一般認(rèn)為培養(yǎng)濾液至少含有 7 種不同的蛋白酶，分子量范圍為 68-130 kDa。

每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化。 它被乙二醇-雙（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。

包裝

按膠原消化單位（CDU）出售的產(chǎn)品。

單位定義

一個膠原蛋白消化單元（CDU）從牛跟腱膠原蛋白中釋放的肽鏈量和1.0 μ亮氨酸，5小時，pH7.4,37℃，在鈣離子存在下的茚三酮顏色相同。一個 FALGPA水解單元每分鐘，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一個中性蛋白酶單元水解酪蛋白，產(chǎn)生顏色和1.0 μmole 酪氨酸每5小時，pH7.5,37℃下產(chǎn)生的相同。一個梭菌蛋白酶單元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分鐘水解1.0 μmole BAEE。

制備說明

膠原酶可以溶解在 TESCA 緩沖液（50 mM TES，0.36 mM 氯化鈣，pH 7.4，37°C）中，濃度為 0.05-0.1 mg/mL。