屬性
質(zhì)量水平
100

形式
liquid

manufacturer/tradename
Specialty Media

technique(s)

transfection: suitable

說明
應(yīng)用
聚凝胺是一種陽離子聚合物，可以大大提高逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的效率。它起到中和病毒體與細(xì)胞表面之間電荷排斥的作用，從而提高感染效率。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的效率在某些細(xì)胞中顯著提高了 100 到 1,000 倍，這是因?yàn)樵诟腥具^程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺儲(chǔ)液還用于介導(dǎo) DNA 轉(zhuǎn)移到多種細(xì)胞類型中，例如 CHO、雞胚成纖維細(xì)胞、NINH-3T3 和髓樣細(xì)胞。

方法：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染

重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液是通過將 5ml 生長培養(yǎng)基（含 5％ 血清）添加接近匯合的轉(zhuǎn)染的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞單層細(xì)胞的 100mm 平板中來制備的。24 小時(shí)后，去除培養(yǎng)基，并通過 0.45um 過濾器過濾。

將要感染該重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液的細(xì)胞以每個(gè) 100mm 平板 500,000 個(gè)細(xì)胞的量接種在 10ml 完全培養(yǎng)基中。

24 小時(shí)后，去除細(xì)胞的生長培養(yǎng)基。用 2ml 的病毒上清液（或?qū)⒉《緝?chǔ)液稀釋至 2ml）感染細(xì)胞，每毫升添加 5ug 至 10ug 的聚凝胺（最終濃度），在 37°C 下孵育細(xì)胞 3 到 6 小時(shí)。

加入 8 ml 完全培養(yǎng)基。感染三天后，將細(xì)胞按 1：5 的比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基。

方法：轉(zhuǎn)染

將細(xì)胞鋪在完全生長培養(yǎng)基中，約有 50％ 匯合。

鋪板后 18 至 24 小時(shí)，立即使用以下方法制備 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液：

注意：必須按照正確的順序添加每個(gè)組件。

1：完全生長培養(yǎng)基（60mm 平板，2ml；

100mm 平板，3ml），加熱至 37°C。

2：質(zhì)粒 DNA，10ng 至 10ug。輕輕混合。

3：聚凝胺的最終濃度為每毫升 5ug 至 10ug。輕輕混合

從平板中去除培養(yǎng)基，并將 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液添加到細(xì)胞中。讓細(xì)胞在 37°C 下孵育 6 到 20 小時(shí)，前 6 個(gè)小時(shí)大約每 1.5 個(gè)小時(shí)輕輕搖動(dòng)一次。

去除 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液，并用 DMSO 儲(chǔ)液輕輕覆蓋細(xì)胞（在 1X HBSS 中的 15％ DMSO：專門培養(yǎng)基（貨號(hào) S-051-D）每個(gè) 60 mm 平板 3 ml，每個(gè) 100 mm 平板 4 ml。手動(dòng)搖動(dòng)培養(yǎng)皿 10 秒鐘，使溶液均勻分布，然后將細(xì)胞置于 37°C 下溫育 4 分鐘。

立即去除 DMSO 儲(chǔ)液，并用完全生長培養(yǎng)基輕輕沖洗細(xì)胞兩次，每個(gè) 60 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 5 ml，每個(gè) 100 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 10 ml

將完全生長培養(yǎng)基添加到細(xì)胞中。

若要獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子，則去除生長培養(yǎng)基，并將細(xì)胞按 1：5 比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基。

若要瞬時(shí)表達(dá)，去除生長培養(yǎng)基并添加新鮮的生長培養(yǎng)基。24 至 72 小時(shí)后收獲細(xì)胞和/或培養(yǎng)基。

提供的試劑通過0.2μm膜過濾并用無菌H2O水化。
外形
每毫升無菌超純水溶解 10mg 聚乙烯。
儲(chǔ)存及穩(wěn)定性
在 -20°C 可保存長達(dá) 2 年。
免責(zé)聲明
除非我們的產(chǎn)品目錄或產(chǎn)品附帶的其他公司文檔另有說明，否則我們的產(chǎn)品僅供研究使用，不得用于任何其他目的，包括但不限于未經(jīng)授權(quán)的商業(yè)用途、體外診斷用途、離體或體內(nèi)治療用途或任何類型的消費(fèi)或應(yīng)用于人類或動(dòng)物。