Wako熱啟動 PCR用DNA聚合酶——Hot-Start Gene Taq
本產(chǎn)品是Hot Star PCR用的耐熱型DNA聚合酶。進入PCR循環(huán)前先經(jīng)過95℃，5分鐘的熱處理，對本產(chǎn)品進行酶活性化處理。
在PCR初期需要進行過量酶活抑制的熱啟動PCR，以抑制引導(dǎo)錯誤、無效酶失活。根據(jù)用途的不同，附有可分開使用的2種10倍濃度的反應(yīng)緩沖液。
◆特點
● 高特異性和DNA高回收率
● 具有熱啟動功能，可在室溫條件下配制反應(yīng)液
● 最適用于多路傳輸PCR
● 極少有宿主源DNA混入，純度高
◆產(chǎn)品組成
| Hot Start Gene Taq | 250 units | 50 units |
| dNTP 混合物 (2.5 mmol/L each) |
800 μL×１瓶 | 160 μL×１瓶 |
| 10×Gene Taq通用緩沖液 (15 mmol/Ll Mg2+) |
1 mL×１瓶 | 1 mL×１瓶 |
| 10×Brilliant Buffer (20 mmol/L Mg2+) |
1 mL×１瓶 | 200 μL×１瓶 |
◆產(chǎn)品信息
| M.W. | 68 kDa |
| 活性 | 2.5 units/μL |
| 單位的定義 | 1 unit是指以活化小牛胸腺DNA為引物/模板，在74℃下，30分鐘內(nèi)，將10nmol的脫氧核苷酸滲入不溶酸沉淀物，使其酶活化。 |
| 形狀 | 20 mmol/l Tris-HCl (pH8.0)、100 mmol/l KCl、0.1 mmol/l EDTA、0.5 % Tween 20、1 mmol/l DTT、50%甘油 |
| 純度 | 將10 units本酶和1μgλ/HindⅢ digest，在74℃下反應(yīng)1小時，無法辨別對瓊脂糖凝膠電泳樣品的影響。 |
◆實驗案例
以HeLa DNA（50ng）為模板，對下列三種擴增困難的引物進行Shuttle PCR。
【引物】
?A-1
F：5′-AGTGGGCAGAGCCAGTCACT-3′
R：5′-AGACTGGATGCCCAGCCTAA-3′
?A-2
F：5′-CAGACTCTGGGGCTGCCCAT-3′
R：5′-TCAAACACTGGCTTGGGGTA-3′
?A-3
F：5′-CCTTGGAGCAATGAGCAATG-3′
R：5′-CATCTTTCCAGGCTCCTTCC-3′
【實驗方法】
| 模板DNA | 50 ng |
| 引物 (10 μM each) | 1 μL |
| 10×反應(yīng)緩沖液 | 5 μL |
| 聚合酶 | 5 μL |
| dNTP 混合物 | 0.2 mM |
| 聚合酶 | 0.25 U |
| 總量 | 50 μL |
| PCR條件 | 95℃, 5 分鐘 ↓ (95℃, 30 sce→68℃, 1.5 min)×30 周期 ↓ 68℃, 3 分鐘 ↓ 4℃ |
【結(jié)果】
在熱啟動Gene Taq使用Brilliant Buffer，即使低特異性的引物，也可實現(xiàn)高特異性擴增，使目的擴增產(chǎn)物取得高回收量。
◆產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| 313-07044 | 熱啟動基因Taq酶
Hot-Start Gene Taq |
50 units |
| 319-07041 | 250 units | |
| 315-07043 | 250 units×4 |