細(xì)胞膜染料–DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS

產(chǎn)品描述

**DiR碘化物的發(fā)射波長肉眼不可見，所以需要配備CCD鏡頭或其他的近紅外檢測儀器。

Di系列染料想必大家一定不陌生，我們做細(xì)胞膜染色的時候經(jīng)常會用到，今天給大家介紹下常見的4類Di染料：DiI, DiO, DiD 和 DiR，Di系列染料是一類環(huán)境敏感型親脂性膜染料，這類探針在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)）結(jié)合時，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這類染料會在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，在其最佳濃度條件下，可以擴(kuò)散逐漸使整個細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。

 

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激發(fā)后可以發(fā)出不同顏色的熒光，DiO和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。

 

DiO、DiI、DiD、DiR的光譜圖

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種染料的異同：

 

其中I、D、R分別代表了一個，兩個，三個雙鍵，它們是決定波長長度的關(guān)鍵，DiO, DiI, DiD 和 DiR這幾款染料的結(jié)構(gòu)式如下：

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR幾種染料的異同：

?產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：

1.?應(yīng)用廣泛：主要作用是標(biāo)記細(xì)胞膜，用于活的或固定的神經(jīng)元等細(xì)胞或組織的長期示蹤劑，同時還可以標(biāo)記其他疏水結(jié)構(gòu)，例如外泌體

2.?不會影響細(xì)胞的生存力

3.?體外培養(yǎng)的條件下可以存活很長時間

4.?在經(jīng)過固定的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的遷移速率為 0.2-0.6mm/day

5.?在活的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的的遷移速率為 6mm/day

關(guān)于染料的使用技巧：

1.DiI 可以溶解于無水乙醇、DMSO 和 DMF，溶解度約為 1-2.5mg/ml，發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)用超聲處理以促進(jìn)溶解。

2.用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時，DiI 的常用濃度為 1-25μM，最常用的濃度為 5-10 μM。

3.?DiI 可以直接染色活的細(xì)胞或組織，染色時間通常為 5-20 分鐘。

4.?染固定的細(xì)胞時，通常使用 4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。

Di家族熒光染料選擇小tips：

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活細(xì)胞或固定細(xì)胞及組織（請您根據(jù)您的需求選擇相應(yīng)的探針），DiI比DiO熒光更亮；DiD，DiR（D12731）波長更長，更適合組織染色；

DiR應(yīng)用實(shí)列賞析：

源文獻(xiàn)：Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model?Journal:?Scientific Reports (2017)

使用方法
1.?DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH?儲存液：儲存液用?DMSO或EtOH配置濃度1～5?mM。
注意：未使用的儲存液保存在-20?oC，避免反復(fù)凍融。
(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)稀釋儲存液，配制濃度為1～5?μM的工作液。
注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找佳條件。
2.?懸浮細(xì)胞染色
(1)懸浮細(xì)胞密度為?1?×?106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞佳培養(yǎng)時間不同。
(3)染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
(5)重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。
3.?粘壁細(xì)胞的染色
(1)使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
(4)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞佳培養(yǎng)時間不同。
(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
4.?顯微鏡檢測
(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
(2)多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：
a)?DiI和DiO=Omega?XF52，Chroma?51004;
b)?DiI和DiD=Omega?XF92，Chroma?51007;
c)?DiI，DiO和DiD=Omega?XF93，Chroma?61005
5.?流式細(xì)胞儀的檢測
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS?染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

儲存條件：DiR碘化物-20℃干燥避光保存，有效期一年。

細(xì)胞膜熒光探針DiR，碘化物

DiR iodide [1，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindotricarbocyanine iodide]