超薄DNA產物純化試劑盒品牌:genefist | 貨號:GF203
儲存條件
該試劑盒置于室溫(15-25℃)干燥條件下,可保存18個月,更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下,若溶液產生沉淀,使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間,必要時可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀。
產品簡介
本試劑盒采用獨特的離心吸附柱純化酶切、PCR等反應溶液中的DNA片段,同時除去蛋白質、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質,回收100 bp-10 kb DNA片段,回收率可達80%以上,可用最少20ul的洗脫液進行洗脫,每個離心吸附柱每次可吸附的DNA量為5 μg,特別適用于較少樣品量的回收。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等實驗。
產品特點
快速:整個操作過程只需十幾分鐘,節(jié)省時間。
多樣:可以回收單鏈、雙鏈DNA片段以及環(huán)狀質粒DNA。
高效:獨特的離心柱和精心配制的緩沖液,可大量回收到高純度目的DNA。
注意事項
1.本試劑盒適用于無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需選擇性回收特定片段,同時去除其他不同大小片段,請選擇膠回收試劑盒。
2.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關,初始量越少、洗脫體積越少,回收率越低。
3.對于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以適當的增加吸附和洗脫的時間。
操作步驟
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽;所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.完成 PCR 擴增或其他酶切反應操作后,移取反應混合液(含有預純化的 DNA)至干凈的離心管。
2.加入 3 倍體積的溶液 PB 至反應混合液中(如 50ul 反應混合液加入 150ul 的結合液),震蕩混合均勻。
3.將吸附柱放入收集管中,移取上一步混合液至吸附柱,室溫放置 2 min,以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘,丟棄收集管中的懸液,將吸附柱 CB3 放回收集管中。
注意:若樣本體積超過 700ul,可分次加入并重復此步驟。
4.向吸附柱 CB3 加入 700ul 的漂洗液 PW,靜置 1 分鐘以平衡管柱膜,于 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1分鐘,丟棄懸液,將吸附柱 CB3 放回收集管中。
5.重復操作步驟 4。
6.將吸附柱 CB3 放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘,將吸附柱開蓋置于室溫放置數分鐘,以去除、晾干殘余的漂洗液。
注意:漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(酶切、PCR 等)實驗。
7.將吸附柱 CB3 置于一個干凈離心管中,向吸附膜中間位置懸空滴加 20-50ul 洗脫緩沖液 TB,室溫放置 2min。12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min 收集 DNA 溶液。
注意:洗脫體積最低不應小于 20 μl,體積過少會影響回收的效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有較大影響,若后續(xù)做測序,需使用 ddH2O 做洗脫液,并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內,pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率;且 DNA 產物應保存在-20℃,以防止 DNA 降解。為了提高 DNA 的回收量,可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中,再次離心管。
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