通用型DNA純化回收試劑盒品牌：genefist | 貨號(hào)：GF214-02 
儲(chǔ)存條件
該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介及特性
本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液體系和離心吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收100 bp-20 kb大小的DNA片段，又能用于直接純化PCR產(chǎn)物，滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。整個(gè)純化過(guò)程可在15分鐘完成、不需進(jìn)行苯酚萃取及酒精沉淀、純化的DNA無(wú)鹽類或大分子的污染。
如果回收前DNA量為1-5ug，建議選用超薄DNA產(chǎn)物純化試劑盒GF203或超薄瓊脂糖凝膠回收試劑盒DF208，推薦洗脫液體積20-50ul。
a.使用相同的溶液，可進(jìn)行三種不同的應(yīng)用（PCR 產(chǎn)物純化、DNA 產(chǎn)物純化、膠體回收）。
b.每一離心管柱可處理達(dá) 150ul 的 DNA 溶液或 PCR 反應(yīng)產(chǎn)物，DNA 回收率可達(dá) 80%~95%。
c.可用于以 TAE 或 TBE 緩沖液配制的瓊脂糖凝膠的 DNA 回收，DNA 回收率可達(dá) 60~90%。
注意事項(xiàng)
1.電泳時(shí)應(yīng)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2.如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用 TAE 電泳緩沖液。
3.切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì) DNA 造成損傷。
4.洗脫緩沖液加量應(yīng)根據(jù)回收前DNA量來(lái)決定：如回收前DNA只有1-5μg左右（推薦選用GF203或GF208超薄型試劑盒），加20-50μl洗脫液；如回收前有5-15μg左右DNA，加30-100μl洗脫緩沖液；如回收前有15-30μg左右DNA，加50-300μl洗脫緩沖液。
5.回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。
6.對(duì)于<100 bp 和>10 kb 的 DNA 片段可以適當(dāng)?shù)脑黾游胶拖疵摰臅r(shí)間。
操作步驟
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
一、從 PCR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中回收 DNA
1.完成 PCR 擴(kuò)增或其他酶切反應(yīng)操作后，移取反應(yīng)混合液（含有預(yù)純化的 DNA）至干凈的離心管。
2.加入 3 倍體積的溶液 PC 至反應(yīng)混合液中（如 50ul 反應(yīng)混合液加入 150ul 的結(jié)合液）,震蕩混合均勻。
3.將吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室溫放置 2 min，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的懸液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。
注意：若樣本體積超過(guò) 700ul，可分次加入并重復(fù)此步驟。
4.加入 700ul 的漂洗液至吸附柱中，靜置 1 分鐘以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄懸液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。
5.重復(fù)操作步驟 4。
6.將吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘，將吸附柱開(kāi)蓋置于室溫放置數(shù)分鐘，以去除、晾干殘余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶切、PCR 等實(shí)驗(yàn)
7.將吸附柱 CB1 置于一個(gè)干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2 min。12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min 收集 DNA 溶液。
注意：洗脫體積不應(yīng)小于 30 μl，體積過(guò)少影響回收效率。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有較大影響，若后續(xù)做測(cè)序，需使用 ddH2O 做洗脫液，并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20°C，以防 DNA 降解。為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，將 DNA 溶液收集到離心管。
二、從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段
1.完成電泳后，將單一的目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量（如果凝膠重為 0.1 g，其體積可視為 100 μl）。
2.向膠塊中加入 2 倍體積（如果瓊脂糖凝膠濃度＞2%，則加入 3 倍體積）的溶液 PC，60℃水浴孵育 5-15 min或更久，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，直至膠塊充分溶解（若膠塊的體積過(guò)大，可事先將膠塊切成碎塊）。
注意：膠塊完全溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合 DNA 的能力較強(qiáng)。
3.將吸附柱放入收集管中，移取上一步溶膠液至吸附柱，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。
注意：若樣本體積超過(guò) 700ul，可分次加入并重復(fù)此步驟。
4.可選步驟：向吸附柱 CB1 加入 400ul 的溶液 PC，以 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄收集管中的濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中（此步驟可去除殘余的瓊脂糖凝膠，以避免純化的 DNA 進(jìn)行酶切反應(yīng)時(shí)出現(xiàn)抑制現(xiàn)象）。
5.向吸附柱加入 700ul 的漂洗液，靜置 1 分鐘以平衡管柱膜，于 12,000 rpm(~13,400×g )離心 1 分鐘，丟棄濾液，將吸附柱 CB1 放回收集管中。
6.重復(fù)操作步驟 5。
7.將吸附柱 CB1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 分鐘，將吸附柱開(kāi)蓋置于室溫放置數(shù)分鐘，以去除、晾干殘余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶切、PCR 等實(shí)驗(yàn)。
8.將吸附柱 CB1 置于一個(gè)干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量洗脫液 TB，靜置 2 分鐘，室溫放置 2 min，12,000 rpm (~13,400×g )離心 2 min 收集 DNA 溶液。
注意：洗脫體積不應(yīng)小于 30 μl，體積過(guò)少影響回收效率。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有較大影響，若后續(xù)做測(cè)序，需使用 ddH2O 做洗脫液，并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，將 DNA 溶液收集到離心管。
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