細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒品牌：genefist | 貨號(hào)：GF302 
選配試劑
RNase A (100 mg/ml)目錄號(hào)：GF0201-01；溶菌酶溶液（50 mg/ml）目錄號(hào)：GF0203-01
儲(chǔ)存條件
該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個(gè)月，更長時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。
產(chǎn)品簡介及特點(diǎn)
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱，和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附 DNA，可有效去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物,用來提取細(xì)菌的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機(jī)溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。
提取得率
材料 提取量 DNA 得率
細(xì)菌培養(yǎng)液 106 -108 cells 5-20ug
注意事項(xiàng)
1.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。
2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。
3.所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下離心。
操作步驟
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
1.取細(xì)菌培養(yǎng)液1-5 ml，10,000 rpm(~11,500×g)離心1 min，盡量吸凈上清。
2.向菌體沉淀中加入200 μl溶液GA，振蕩至菌體徹底懸浮。
注意：對(duì)于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第2步驟，加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理，具體方法為：
加入110 μl溶菌酶緩沖液（20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%Triton），和70 μl溶菌酶溶液（50 mg/ml，客戶自備，目錄號(hào)：RT401），37 ℃處理30min以上。
如果需要去除RNA，可加入4 μlRNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號(hào)：GF1202-01），振蕩15 sec，室溫放置5 min。
3.向管中加入20μl Proteinase K溶液，混勻。
4.加入200 μl溶液BG，振蕩15 sec，70 ℃放置10 min，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
5.加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放回收集管中。
7.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。
注意：這一步驟對(duì)于清除內(nèi)切酶是必不可少的，以防止污染。
8.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。
9.重復(fù)操作步驟 8。
10.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR 等）實(shí)驗(yàn)。
11.將吸附柱 CG1 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。
注意：洗脫液體積不應(yīng)少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。
若用 ddH2O 做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。
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