酵母基因組DNA提取試劑盒品牌：genefist | 貨號：GF307 
選配試劑
RNase A (100 mg/ml)目錄號：GF020-01
儲存條件
該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存18個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀。
產品簡介
本試劑盒采用可以特異性結合 DNA 的離心吸附柱，和獨特的緩沖液系統(tǒng)，能高效、專一吸附 DNA，可有效去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物,用來提取酵母細胞中的基因組 DNA。不需要苯酚、氯仿等有機溶劑，安全方便；提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern 雜交等實驗。
菌體濃度檢測
可采用分光光度計或平板培養(yǎng)法檢測菌體量，一般對于釀酒酵母，OD600值為1.0時，相當于1-2×107cells / ml。
注意事項
1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。
2.若溶液 GA 或溶液 BG 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。
3.所有離心步驟均為使用臺式離心機，室溫下離心。
需要自備的試劑
1.溶壁酶 Lyticase（目錄號：GF0210-01）
2.山梨醇 buffer：
用0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;
0.1M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)的配制：77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4
操作步驟
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1.取酵母細胞（最多不超過5×107 cells），12,000 rpm(~13,400×g )離心1 min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。
2.酵母細胞壁的破除：
酶法：向菌體中加入600 μl山梨醇buffer，加入大約200 U Lyticase（客戶自備，目錄號：GF1203-01），充分混勻。30℃處理30 min。4000 rpm(~1500×g)離心10 min，棄上清，收集沉淀。
注意：以上為5×107酵母細胞的Lyticase用量，根據酵母的菌株和酵母細胞數量的不同，所用Lyticase的濃度和孵育時間應該進行適當調整。
3. 向沉淀中加入200 μl溶液GA重懸沉淀，充分混勻。
如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：GF020-01），振蕩15 sec，室溫放置5 min。
4.加入20 μl Proteinase K溶液，混勻。
5.加入200 μl溶液BG，充分顛倒混勻，70℃放置10 min，溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
注意：加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取DNA量少和提取的DNA不純。
6.加入 200ul 無水乙醇，充分振蕩混勻 15sec，此時可能會出現絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
7.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱 CG1 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放回收集管中。
8.向吸附柱 CG1 中加入 300μl 溶液 BG，12,000rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。
注意：這一步驟對于清除內切酶是必不可少的，以防止污染。
9.向吸附柱 CG1中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心 30 sec，倒掉廢液，將吸附柱 CG1 放入收集管中。
10.重復操作步驟 9。
11.將吸附柱 CG1 放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CG1 置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切、PCR 等）實驗。
12.將吸附柱 CG1 轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200μl 洗脫緩沖液 TB，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。
注意：洗脫液體積不應少于 50μl，體積過小影響回收效率。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用 ddH2O 做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CG1 中,室溫放置 2 min，12,000 rpm(~13,400×g )離心 2 min。
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