TMB one Solution(HRP-based ELISA)

單組份TMB顯色液（Elisa HRP 顯色用）

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
NBS0201 -100ml	TMB one Solution(HRP-based ELISA) 單組份TMB顯色液（Elisa HRP 顯色用）	100ml
NBS0201 -500ml		500ml

 

產(chǎn)品描述

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）廣泛用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）及其偶聯(lián)物是ELISA技術(shù)常用的一種酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，從而進(jìn)行定量或定性分析。由于TMB比其他顯色底物具更高的靈敏度且無致癌性被廣泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑點雜交或免疫組化等實驗，也有報道將其用于氯的檢測分析。

通常TMB顯色試劑由多個組分構(gòu)成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對不便且容易導(dǎo)致檢測結(jié)果不穩(wěn)定。本品采用全新的TMB顯色技術(shù)，將所有相關(guān)試劑全部配在一個溶液，即僅由單一溶液組成，不僅簡化了操作步驟，而且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

本品專門為ELISA實驗而設(shè)計。檢測原理在于HRP或其他適當(dāng)過氧化物酶能催化生成可溶的藍(lán)色產(chǎn)物，此時通?？稍?span>370nm測定吸光度。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液（如0.5-2M H₂SO₄，0.5M HCL，1M H₃PO₄）終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色，此時可在450nm測定吸光度。由于本品顯色敏感度高，線性濃度范圍較寬，極其適合用于定量ELISA分析。

本品用于ELISA檢測，每個樣品通常使用0.1ml顯色液，則100ml本品約檢測1000個樣品，500ml本品約檢測5000個樣品。

 

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光保存，2年有效。

運輸：冰袋運輸。

 

注意事項

1) 本品含TMB和H₂O₂，對人體有刺激性，請注意防護。

2) 如發(fā)現(xiàn)本品出現(xiàn)渾濁或顏色變?yōu)樗{(lán)色，請停止使用。

3) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

使用方法（ELISA）

1) 使用之前，取出適量單組份TMB顯色液，使其回到室溫再開始使用；

2) 參考ELISA檢測試劑盒的實驗步驟，當(dāng)與HRP標(biāo)記抗體孵育一段時間后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5min。

3) 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入100μl單組份TMB顯色液。

4) 室溫避光孵育5-30min或更長時間（可長達(dá)24h），直至顯色到預(yù)期深淺?！咀⒁狻浚航ㄗh根據(jù)實驗需求選擇最佳試劑用量、顯色時間和反應(yīng)溫度。

5) 直接在370nm測定吸光度。或者加入100μl 0.5-2M H₂SO₄終止反應(yīng)，隨后在450nm測定吸光度。

 

常用問題

1. 背景顯色太深

1）如果背景（沒有樣品的對照）顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，如商業(yè)化封閉液或者和一抗相同來源的血清（10%）進(jìn)行封閉。另一方面，使用經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。

2）可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛?。另外，選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。

 

2. 沒有顯色或顯色太弱

1）適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測二抗是否被正常顯色。

2）可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如生物素檢測體系。

3）可以適當(dāng)延長顯色時間。

4）如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。