CellufineTMPhosphate
用于純化核酸結(jié)合蛋白，例如 T7 RNA 聚合酶，它是一種合成 mRNA 藥物的酶
Cellufine Phosphate是一款親和填料，旨在濃縮，純化蛋白以及與核酸相關(guān)的蛋白質(zhì)之類的酶。 填料是將磷酸酯配基固定在具有良好剛性的纖維素微球上而成。 由于 T7 RNA 聚合酶是 mRNA 藥物的合成酶，是一種核酸結(jié)合蛋白，因此可以通過細(xì)胞細(xì)磷酸鹽高效純化。
T7 RNA聚合酶純化實(shí)例Purification of T7 RNA polymerase
T7 RNA 聚合酶是一種關(guān)鍵的 RNA 合酶，用于在體外轉(zhuǎn)錄合成中從模板 DNA 合成 mRNA。 在這種情況下，高純度T7 RNA聚合酶通過兩步層析步驟純化， 首先用Cellufine MAX DEAE進(jìn)行粗純化，然后用Cellufine Phosphate進(jìn)行親和純化。
利用從Cellufine MAX DEAE和Cellufine Phosphate的各精制工序中得到的餾分，然后用SDS-PAGE對精制進(jìn)行評價(jià)。 每經(jīng)過一個(gè)層析工序，雜質(zhì)雜質(zhì)就會被去除，而在用Cellufine Phosphate精制的階段，精制得到的T7 RNAP純度幾乎達(dá)到單頻帶，非常高。
色譜分析
- 層析柱
- 1.6x10cm (20ml) 裝填 Cellufine Phosphate
- 流速
- 3ml/min( 90cm/h )
- 樣品
- 7.5mg經(jīng)肝素瓊脂糖填料純化后的RusA D70N
- 梯度
- 200ml 50mM tris-HCl pH 8.0，氯化鈉濃度從0.1-1.3M
聚丙烯酰胺凝膠電泳
- 凝膠
- 4-12%濃度的梯度膠，使用MES-SDS緩沖液(Invitrogen)
- 電泳膠順序
- 1 細(xì)胞提取液
2 肝素瓊脂糖層析柱流穿
3 肝素瓊脂糖純化樣
4-6 Cellufine Phosphate純化樣
7 RusA標(biāo)準(zhǔn)對照樣
8 Mark 12 對照分子量標(biāo)準(zhǔn)品 (Invitrogen)