JNC株式會社 CellufineTMPhosphate 親和層析填料

CellufineTMPhosphate
用于純化核酸結(jié)合蛋白,例如 T7 RNA 聚合酶,它是一種合成 mRNA 藥物的酶

Cellufine Phosphate是一款親和填料,旨在濃縮,純化蛋白以及與核酸相關(guān)的蛋白質(zhì)之類的酶。 填料是將磷酸酯配基固定在具有良好剛性的纖維素微球上而成。 由于 T7 RNA 聚合酶是 mRNA 藥物的合成酶,是一種核酸結(jié)合蛋白,因此可以通過細胞細磷酸鹽高效純化。

T7 RNA聚合酶純化實例Purification of T7 RNA polymerase

T7 RNA 聚合酶是一種關(guān)鍵的 RNA 合酶,用于在體外轉(zhuǎn)錄合成中從模板 DNA 合成 mRNA。 在這種情況下,高純度T7 RNA聚合酶通過兩步層析步驟純化, 首先用Cellufine MAX DEAE進行粗純化,然后用Cellufine Phosphate進行親和純化。

利用從Cellufine MAX DEAE和Cellufine Phosphate的各精制工序中得到的餾分,然后用SDS-PAGE對精制進行評價。 每經(jīng)過一個層析工序,雜質(zhì)雜質(zhì)就會被去除,而在用Cellufine Phosphate精制的階段,精制得到的T7 RNAP純度幾乎達到單頻帶,非常高。

色譜分析

層析柱
1.6x10cm (20ml) 裝填 Cellufine Phosphate
流速
3ml/min( 90cm/h )
樣品
7.5mg經(jīng)肝素瓊脂糖填料純化后的RusA D70N
梯度
200ml 50mM tris-HCl pH 8.0,氯化鈉濃度從0.1-1.3M

聚丙烯酰胺凝膠電泳

凝膠
4-12%濃度的梯度膠,使用MES-SDS緩沖液(Invitrogen)
電泳膠順序
1 細胞提取液
2 肝素瓊脂糖層析柱流穿
3 肝素瓊脂糖純化樣
4-6 Cellufine Phosphate純化樣
7 RusA標準對照樣
8 Mark 12 對照分子量標準品 (Invitrogen)