CellufineTMGH-25 凝膠過濾色譜填料
Cellufine GH-25脫鹽凝膠過濾色譜填料以多孔，球形，高度交聯(lián)的纖維素粒子為基質(zhì)。 3kD的排阻極限允許蛋白質(zhì)通過填料顆粒間的空隙體積穿過色譜柱，同時在內(nèi)部孔隙中減速小分子溶質(zhì)的穿過。 其出色的機械強度即使在大直徑工藝生產(chǎn)規(guī)模的層析柱中也能以高流速運行，從而最大限度地縮短了工藝生產(chǎn)時間。
Cellufine GH-25的剛性使其非常適合大型色譜柱層析使用，因為它能夠在非常高的流速下操作， 可運行多個較小的色譜柱進行多次循環(huán)，從而可以獲得與較大色譜柱上以較低流速運行時相同的產(chǎn)量。 與傳統(tǒng)層析法不同的是，脫鹽層析法的性能（通過上樣、鹽分去除和稀釋來測量）可以隨著流速的增加而提高， 這是由于在高容量填充下樣品稀釋率降低所致。
應(yīng)用
- 凍干或濃縮前的脫鹽
- 緩沖液交換
- 去除乙醇或其他有機溶劑
- 在核酸純化中去除芳香族化合物（例如苯酚）
- 去除用于溶解蛋白質(zhì)的洗滌劑 (例如 Triton? X-100, SDS)
- 使用所有常用的溶劑及緩沖液時不會出現(xiàn)凝膠的收縮或膨脹
- 去除離液劑，（如尿素，胍）
優(yōu)點
- 高流速和短運行時間
- 上様量大（典型代表例：5-30分鐘的運行時間，從1毫升到100升，載荷高達35％柱床體積）
- 非特異性吸附率低、回收率高
- 易于包裝
- 易于清潔和去除熱原
- 使用所有常用的溶劑及緩沖液時不會出現(xiàn)凝膠的收縮或膨脹
- 可滅菌
特征
- 剛性的球形顆粒
- 高效脫鹽
- 親水性
- 預(yù)溶脹膠
- pH穩(wěn)定範(fàn)囲1-14（0.1M HCl，0.5M NaOH）
- 耐有機溶劑
- 可高壓滅菌（121°C，30分鐘）
去除乙醇
人類血液制品的分離以及隨后從白蛋白中去除乙醇，是白蛋白生產(chǎn)的兩個重要影響因素。 表1比較了GH-25凝膠在兩種不同流速下從白蛋白中除去乙醇的情況。增加流速并不影響脫醇效率、白蛋白回收率或樣品稀釋。 兩種流速下，剩余乙醇濃度均低于0.01%。通過將流量從29 cm/h/cm2增加到100 cm/h/cm2，可將生產(chǎn)周期縮短至四分之一。
| 運行編號 | 1 | 2 |
| 凝膠 | GH-25 | GH-25 |
| 柱直徑 (mm) | 50 | 50 |
| 柱高 (mm) | 680 | 670 |
| 柱體積 (ml) | 1335 | 1320 |
| 流速 (ml/hr) | 570 | 2010 |
| 線速度 (ml/h/cm2) | 29 | 102 |
| 一循環(huán)周期時間 (hr) | 2.3 | 0.6 |
| 產(chǎn)品應(yīng)用 | ||
| 上樣體積 (ml) | 310 | 310 |
| 處理量 (% Vt) | 23 | 23 |
| 白蛋白濃度 (%) | 12 | 12 |
| 乙醇濃度 (%) | 4.8 | 4.8 |
| 產(chǎn)品回收 | ||
| 回收體積 (ml) | 546 | 525 |
| 稀釋系數(shù) | 1.8x | 1.7x |
| 回收白蛋白濃度 (%) | 6.6 | 6.9 |
| 殘留乙醇濃度 (%) | 0.002 | 0.01 |
| 白蛋白回收率 (%) | 97 | 98 |
工業(yè)脫鹽
利用層析法進行生物分子的脫鹽其優(yōu)點己在大量應(yīng)用中得到験証。 從研究到中試以及工業(yè)化生產(chǎn)， Cellufine GH-25的放大已被證明是直接可靠無誤的。 GH-25的機械穩(wěn)定性使其可以在大規(guī)格層析柱中使用高流速。
一個需要每天處理225升的典型大型脫鹽應(yīng)用，可以用5升Cellufine GH-25在105×587毫米的層析柱中完成（見表2）。 這種剛性凝膠在這根層析柱中可以承受1250毫升/分鐘的流速(870毫升/厘米/平方厘米)。每個循環(huán)周期為8分鐘。 在不犧牲分辨率或純度的情況下，填料可以適應(yīng)更高的載荷(柱體積的25%)。
| 裝填 | Cellufine GH-25 |
| 層析柱 (mm) | 105 x 587 |
| 柱體積 | 5.1 升 |
| 流速 (ml/min)(升/小時) | 1250(75 升/小時) |
| 線速度 | 870 ml/h/cm2 |
| 產(chǎn)品 | 1.5M NaCL中含5％w / v蛋白質(zhì) |
| 產(chǎn)品體積 | 1.27 升 (25 % 柱體積) |
| 產(chǎn)品質(zhì)量/周期 | 63.6g |
| 周期/天 | 180 |
| 產(chǎn)品質(zhì)量/天 | 11.4kg |
| 蛋白質(zhì)回收率 | 99.50% |
| 鹽交換率 | 99 % (0.015M 最終濃度) |
| 樣品稀釋倍數(shù) | 1.13 |
| 總產(chǎn)品回收體積 | 257 升 |
| 每天處理產(chǎn)品體積 | 225 升 |