產(chǎn)品編號
JJJP5
Rat IL-10 ELISA Kit
96次
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的Rat IL-10 ELISA Kit (Rat Interleukin-10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白細胞介素10酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-10的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為28pg/ml，與CDNF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、PDGF-BB、TNF-α、人IL-10、小鼠IL-10等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
IL-10即白細胞介素-10(簡稱白介10)，又稱細胞因子合成抑制因子(CSIF)，屬于IL-10α螺旋細胞因子家族中的一員，該家族還包括IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26/AK155。IL-10通常由活化的造血細胞分泌，此外肝星狀細胞、角質(zhì)細胞和胚胎滋養(yǎng)葉細胞也能分泌IL-10。小鼠細胞能夠響應(yīng)人IL-10，而小鼠的IL-10并不能作用于人源細胞上。成熟的大鼠IL-10與小鼠IL-10具有85%的氨基酸同源性，與牛、犬、馬、豚鼠、貓、人、綿羊和豬的IL-10具有71-79%的氨基酸同源性。成熟的IL-10分子量在36kDa，其包含兩個鏈內(nèi)二硫鍵，以非共價二聚體的形式存在。
IL-10受體復(fù)合物由兩部分組成：IL-10 Rα，分子量為110kDa的跨膜糖蛋白，主要表達在淋巴細胞，自然殺傷細胞、巨噬細胞、單核細胞、星形膠質(zhì)細胞、腸內(nèi)皮細胞、胚胎滋養(yǎng)葉細胞和活化的肝星狀細胞；IL-10?Rβ同樣為跨膜蛋白，分子量在75kDa，在多種細胞上都有表達。IL-10二聚體與兩條IL-10 Rα鏈結(jié)合，隨后招募兩條IL-10 Rβ鏈。IL-10 Rβ并不能直接與IL-10結(jié)合，但它在信號傳導(dǎo)過程中起重要作用。IL-10 Rβ同時還是IL-22、IL-26、IL-28和IL-29的受體組成部分。
IL-10對免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)有刺激和抑制兩方面的作用。IL-10能抑制Th1細胞和Th2細胞的活化和擴增，能促進M2型巨噬細胞的產(chǎn)生。Treg細胞和調(diào)節(jié)性B細胞分泌的IL-10對Treg細胞的生長起重要作用，然而在腫瘤微環(huán)境中，IL-10則會抑制Treg細胞的擴增。IL-10可以促進CD8+ T細胞在腫瘤部位的蓄積和擴增，IL-10在Sjogren’s 綜合征、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤和卵巢癌中表達上升。
IL-10與受體復(fù)合物結(jié)合后首先導(dǎo)致JAK1和YTK2的磷酸化，隨后使得STAT1和STAT3發(fā)生磷酸化。磷酸化的STAT3形成二聚體進入細胞核對靶基因進行調(diào)控。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中大鼠IL-10的濃度，其原理見圖1。小鼠IL-10特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的大鼠IL-10會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠IL-10抗體后，生物素化抗大鼠IL-10抗體與大鼠IL-10結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。大鼠IL-10濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJJP5-1
大鼠IL-10抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP5-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJJP5-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP5-4
大鼠IL-10標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP5-5
大鼠IL-10生物素化抗體
10ml
JJJP5-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP5-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP5-8
TMB溶液
10ml
JJJP5-9
終止液
5ml
JJJP5-10
封板膜(透明)
2張
JJJP5-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB對人體有刺激性，操作時請小心，并注意適當(dāng)防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。