產(chǎn)品編號(hào)
PE230
Human EPO ELISA Kit
96次
3518
的Human EPO ELISA Kit (Human Erythropoietin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即人促紅細(xì)胞生成素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒,是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的EPO的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明,最小檢出量為14.4pg/ml,與人IL-1β、IL-1RA、IL-2、IL-3、 IL-4 、IL-5 、IL-6、 IL-8、IL-10、小鼠 EPO等均沒(méi)有交叉反應(yīng),板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin, EPO)是由腎臟產(chǎn)生的一種糖蛋白,參與調(diào)節(jié)哺乳類動(dòng)物中紅細(xì)胞生成。EPO的產(chǎn)生受到氧利用率變化的調(diào)節(jié),在缺氧條件下,EPO水平會(huì)有所上升,從而導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)量增加。EPO的過(guò)表達(dá)與部分病理生理性變化相關(guān)。紅血球增多癥是指體內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量過(guò)多,原發(fā)性紅血球增多癥主要是由于EPO非依賴性的紅細(xì)胞祖細(xì)胞生長(zhǎng),患者血液中EPO濃度基本處于正常水平。然而,繼發(fā)性紅血球增多的發(fā)生則與異常升高的EPO水平有關(guān)。當(dāng)居住于高海拔地區(qū)或出現(xiàn)慢性阻塞性肺疾病、紫紺型心臟病、睡眠呼吸障礙、血紅蛋白病、吸煙和局部性腎組織缺氧時(shí),機(jī)體會(huì)呈現(xiàn)缺氧狀態(tài),此時(shí)機(jī)體會(huì)出現(xiàn)適應(yīng)性反應(yīng),上調(diào)EPO的產(chǎn)生。另外,在多種腫瘤患者中也會(huì)出現(xiàn)EPO水平增加、紅細(xì)胞數(shù)增多的情況。EPO濃度過(guò)低與某些特定類型的貧血癥相關(guān),例如腎性貧血和慢性貧血、早產(chǎn)性貧血、甲狀腺功能減退性貧血和營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致的貧血。上述許多情況都與IL-1和TNF-α有關(guān),這兩種細(xì)胞因子能夠抑制EPO的活性,從而抑制血紅細(xì)胞產(chǎn)生。但是有部分形式的貧血屬于EPO非依賴性,因此在這些患者中EPO通常仍舊處于較高水平,例如再生障礙性貧血、缺鐵性貧血、地中海貧血、巨幼紅細(xì)胞性貧血和骨髓增生異常綜合征等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人EPO的濃度,其原理見(jiàn)圖1。人EPO特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí),其中的人EPO會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人EPO抗體后,生物素化抗人EPO抗體與人EPO結(jié)合,形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合,因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液,固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì),在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人EPO濃度與A450值呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)照樣品吸光度值,即可計(jì)算出樣品中人EPO濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒,包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè),可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PE230-1
人EPO抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PE230-2
樣品分析緩沖液
5ml
PE230-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PE230-4
人EPO標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PE230-5
人EPO生物素化抗體
10ml
PE230-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PE230-7
洗滌液(20X)
30ml
PE230-8
TMB溶液
10ml
PE230-9
終止液
5ml
PE230-10
封板膜(透明)
2張
PE230-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件:
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存,1-2周內(nèi)有效,-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效;試劑盒其它組份4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外,試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng):
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉,在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn),所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶,如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性,標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后,如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬,否則容易失效。
加樣時(shí),請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試,所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分,即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí),請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑,請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡWC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要,在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板,以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行,要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要,洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔,以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。