產(chǎn)品編號(hào)
JJP66
Mouse Leptin ELISA Kit
96次
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??????的Mouse Leptin ELISA Kit (Mouse Leptin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠瘦素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Leptin的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為134.6pg/ml，與人G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6等均沒有交叉反應(yīng)，與大鼠Leptin有40%交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????小鼠瘦素(Leptin)是小鼠obese基因產(chǎn)物，該基因出現(xiàn)異常后，小鼠會(huì)出現(xiàn)肥胖、糖尿病、代謝緩慢和體溫降低的情況。成熟的小鼠瘦素與大鼠瘦素和人瘦素分別具有96%和84%的氨基酸同源性。小鼠瘦素cDNA編碼產(chǎn)生167個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽，剪切掉21個(gè)氨基酸的信號(hào)肽后得到成熟的蛋白分子。瘦素mRNA被證實(shí)僅在胚胎和脂肪組織中表達(dá)。
??????瘦素的高親和受體OB-R與糖蛋白130和粒細(xì)胞集落刺激因子受體具有一定的同源性，根據(jù)胞外域長(zhǎng)度的不同分為OB-RL和OB-RS。OB-RL具有完整的胞外域，具有信號(hào)傳導(dǎo)的能力；OB-RS胞外域較短，只能與瘦素結(jié)合，但不能傳遞信號(hào)。OB-RL主要表達(dá)在下丘腦，被認(rèn)為是體重調(diào)節(jié)的重要分子；OB-RS則在肺、腎和造血細(xì)胞等多處都有表達(dá)。在小鼠、大鼠和人血漿中都檢測(cè)到了較高濃度的瘦素，在進(jìn)食或受到胰島素、胰高血糖素、細(xì)胞因子刺激后的機(jī)體應(yīng)答中，瘦素被認(rèn)為發(fā)揮了重要的作用。血漿中，瘦素主要以與瘦素結(jié)合蛋白結(jié)合的形式存在。
??????瘦素受體與瘦素結(jié)合后通過(guò)招募JAK2使瘦素受體上的三個(gè)關(guān)鍵酪氨酸位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，磷酸化的Tyr位點(diǎn)能夠招募STAT3并使之磷酸化激活，隨后發(fā)生二聚化進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮功能，啟動(dòng)SOCS3和NpY等靶基因的表達(dá)；另外，SOCS3蛋白又能抑制激活的JAK2-STAT3通路，從而實(shí)現(xiàn)負(fù)反饋調(diào)節(jié)。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠Leptin的濃度，其原理見圖1。小鼠Leptin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠Leptin會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠Leptin抗體后，生物素化抗小鼠Leptin抗體與小鼠Leptin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠Leptin濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠Leptin濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP66-1
小鼠Leptin抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP66-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP66-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml
JJP66-4
小鼠Leptin標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP66-5
小鼠Leptin生物素化抗體
10ml
JJP66-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP66-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP66-8
TMB溶液
10ml
JJP66-9
終止液
5ml
JJP66-10
封板膜(透明)
2張
JJP66-11
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書
1份
保存條件：
??????標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。