產(chǎn)品編號
PF317
Mouse FGF-acidic ELISA Kit
96次
3401
生產(chǎn)的Mouse FGF-acidic ELISA Kit (Mouse Fibroblast Growth Factor acidic Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的FGF-acidic的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為11.6pg/ml，與小鼠的FGF-basic，S100A13沒有交叉反應(yīng)，與人FGF-acidic有21.9%的交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
酸性成纖維細(xì)胞生長因子(Fibroblast Growth Factor acidic, FGF-acidic)，又稱FGF-1、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Endothelial Cell Growth Factor, ECGF)或肝素結(jié)合生長因子(Heparin-Binding Growth Factor, HBGF-1)，是一種分子量在17-18kDa之間的非糖 基化多肽，由多種細(xì)胞分泌產(chǎn)生。FGF-acidic分子具有155個氨基酸，不存在明顯的信號肽序列，因此排除了FGF-acidic以 經(jīng)典的ER/Golgi通路分泌的可能。FGF-acidic可能具有一種特殊的分泌方式，并且需要熱休克蛋白、磷酯酰絲氨酸、突觸結(jié)合蛋白1和膜聯(lián)蛋白的參與。FGF-acidic以二聚體的形式分泌，還原劑能夠破壞分子間的共價鍵，從而釋放具有生物活性的FGF-acidic。與FGF-2不同，F(xiàn)GF-acidic不具有可變的5’端轉(zhuǎn)錄起始位點，目前發(fā)現(xiàn)的FGF-acidic剪切變體是一種氨基酸長度為66的變體，其能與FGF受體結(jié)合但不能激活受體，具體的生物功能尚不明確。全長形式的FGF-acidic具有一個氨基酸長度在21-27之間的細(xì)胞核定位序列。表達(dá)FGF-acidic的細(xì)胞主要有乳腺上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、骨骼及平滑肌細(xì)胞、腎近端小管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
FGF家族共有5個相應(yīng)受體(FGF R1-R5)，其中FGF R1-R4都屬于免疫球蛋白家族(Ig-Superfamily, IgSF) I型跨膜酪氨酸激酶受體，而FGF R5雖然也屬于免疫球蛋白家族成員，但缺少酪氨酸激酶區(qū)域。FGF-acidic主要與FGF R1-R4結(jié)合。FGF-acidic與受體結(jié)合后能夠激活酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號通路，F(xiàn)GF和肝素之間的相互作用既能激活受體也能抑制受體，當(dāng)表現(xiàn)為激活作用時，肝素主要是作為FGF與FGF R之間的中心連接物而存在。FGF-acidic也能與細(xì)胞表面的肝素單獨結(jié)合，此時只能誘導(dǎo)發(fā)生內(nèi)化作用而并不存在細(xì)胞活化作用。
? FGF-acidic能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，無論是細(xì)胞膜表面受體激活還是內(nèi)化作用對完整的有絲分裂應(yīng)答都必不可少。另外，F(xiàn)GF-acidic還能促進(jìn)平滑肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖。在發(fā)育和再生過程中FGF-acidic同樣具有重要作用。FGF-acidic能夠通過Notch-Delta通路抑制神經(jīng)元細(xì)胞的分化，誘導(dǎo)垂體前葉泌乳素細(xì)胞分化，促進(jìn)受損外周神經(jīng)軸突再生。另外，在CD4+ T細(xì)胞增殖過程中，F(xiàn)GF-acidic還是重要的共刺激分子，能夠促進(jìn)IL-2的分泌。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠FGF-acidic的濃度，其原理見圖1。小鼠FGF-acidic特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的小鼠FGF-acidic會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠FGF-acidic抗體后，生物素化抗小鼠FGF-acidic抗體與小鼠FGF-acidic結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠FGF-acidic濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PF317-1
小鼠FGF-acidic抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PF317-2
樣本分析緩沖液
5ml
PF317-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PF317-4
小鼠FGF-acidic標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PF317-5
小鼠FGF-acidic生物素化抗體
10ml
PF317-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PF317-7
洗滌液(20X)
30ml
PF317-8
TMB溶液
10ml
PF317-9
終止液
5ml
PF317-10
封板膜(透明)
2張
PF317-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
