Mouse FGF-21 ELISA Kit

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產(chǎn)品編號(hào)

PF311
Mouse FGF-21 ELISA Kit
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的Mouse FGF-21 ELISA Kit (Mouse Fibroblast Growth Factor-21 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠成纖維生長(zhǎng)因子21酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的FGF-21的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為14.5pg/ml，與小鼠的FGF-15、FGF-23沒(méi)有交叉反應(yīng)，與人的FGF-21有1.9%交叉反應(yīng)性，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21 (Fibroblast growth factor 21, FGF21)屬于FGF家族，根據(jù)結(jié)構(gòu)特性其屬于FGF-19亞族，該亞族中還包括FGF-19和FGF-23成員。FGF家族成員大都具有一個(gè)氨基酸長(zhǎng)度為120的核心FGF區(qū)域，該區(qū)域具有β-trefoil結(jié)構(gòu)。FGF19亞族成員與其他FGFs不同，其并不含有β-trefoil結(jié)構(gòu)，并且也不能與肝素等細(xì)胞外基質(zhì)分子牢固結(jié)合。因此，F(xiàn)GF-19亞族成員與其它FGFs相比更容易擴(kuò)散。FGF-19亞族成員利用輔助受體klotho家族直接與FGF受體結(jié)合，參與調(diào)控代謝相關(guān)過(guò)程。FGF-21利用C端序列與β-Klotho結(jié)合，從而傳遞信號(hào)。成熟小鼠FGF-21與成熟的人和大鼠FGF-21的同源性分別為81%和92%[1]。
當(dāng)PPARα/RXR復(fù)合物受到游離脂肪酸刺激后，會(huì)刺激肝細(xì)胞產(chǎn)生FGF-21。FGF-21分泌后，會(huì)誘導(dǎo)白色脂肪組織分泌游離脂肪酸，隨后游離脂肪酸在肝臟發(fā)生氧化，最終產(chǎn)生乙酰輔酶A，隨后乙酰輔酶A與一些4碳酮結(jié)合，參與能量生成。另外在脂肪組織中，F(xiàn)GF-21與PPARγ協(xié)同作用，產(chǎn)生更多的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體，從而增加葡萄糖攝取。FGF-21能夠穿過(guò)血腦屏障，并造成精神遲緩，缺乏活力，在禁食或冬天時(shí)這會(huì)造成類(lèi)似于冬眠的現(xiàn)象出現(xiàn)。在db/db和ob/ob小鼠中，F(xiàn)GF-21能夠調(diào)整葡萄糖和甘油酸三酯的值恢復(fù)到接近正常的水平，并增加胰島素的敏感性[2,3]。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠FGF-21的濃度，其原理見(jiàn)圖1。小鼠FGF-21特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠FGF-21會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠FGF-21抗體后，生物素化抗小鼠FGF-21抗體與小鼠FGF-21結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠FGF-21濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝

PF311-1
小鼠FGF-21抗體預(yù)包被板
8孔×12條

PF311-2
樣品分析緩沖液
5ml

PF311-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml

PF311-4
小鼠FGF-21標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

PF311-5
小鼠FGF-21生物素化抗體
10ml

PF311-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml

PF311-7
洗滌液(20X)
30ml

PF311-8
TMB溶液
10ml

PF311-9
終止液
5ml

PF311-10
封板膜(透明)
2張

PF311-11
封板膜(白色)
2張

—
說(shuō)明書(shū)
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。