產(chǎn)品編號
PA030
Human ApoE ELISA Kit
96次
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的Human ApoE ELISA Kit (Human Apolipoprotein E Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人載脂蛋白E酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的ApoE的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為79.6pg/ml，與人ApoA1、ApoA2、ApoB、ApoB100、ApoC1、ApoC2、ApoD等均沒有交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
載脂蛋白E (Apolipoprotein E)是血液中低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和乳糜顆粒中重要的蛋白組成部分，在淀粉樣蛋白代謝和阿爾茨海默病發(fā)展中具有重要作用。ApoE主要由肝細胞、巨噬細胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的非神經(jīng)元細胞產(chǎn)生。ApoE能夠?qū)⒏视腿ズ湍懝檀歼\送至周圍組織中用于細胞吸收和分解代謝，并且能夠?qū)⒏呙芏戎鞍缀腿槊游⒘７聪蜻\輸至肝臟中。成熟的人ApoE分子量為34kDa，由4個捆綁的α螺旋結(jié)構(gòu)N端、鉸鏈區(qū)和延伸的α螺旋C端組成。由于ApoE結(jié)構(gòu)靈活且具有良好的親脂親水特性，多種脂蛋白都能夠與ApoE進行結(jié)合。ApoE以單體形式與脂蛋白結(jié)合，其余情況下則以低聚物的形式存在。成熟的人ApoE與小鼠和大鼠ApoE具有71%的序列相似性。
許多低密度脂蛋白受體都會優(yōu)先與脂蛋白結(jié)合形式的ApoE結(jié)合，并促使其發(fā)生內(nèi)化。極低密度脂蛋白受體與未結(jié)合脂蛋白的ApoE也能夠結(jié)合，并促使其內(nèi)化。脂蛋白的吸收主要受到ApoE與細胞表面硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan Sulfate Proteoglycan, HSPG)結(jié)合的幫助。ApoE的N端和C端分別介導ApoE與受體、HSPG的結(jié)合以及和脂蛋白的相互作用。細胞內(nèi)高濃度的甾醇物質(zhì)能夠激活核激素受體LXR，從而增加ApoE的合成和甾醇外排。ApoE能夠抑制TNF-α、TLR3和TLR4介導的炎癥反應，促進Treg細胞和M2型巨噬細胞發(fā)展。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人ApoE的濃度，其原理見圖1。人ApoE特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人ApoE會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗人ApoE抗體后，生物素化抗人ApoE抗體與人ApoE結(jié)合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人ApoE濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人ApoE濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PA030-1
人ApoE抗體預包被板
8孔×12條
PA030-2
標準品稀釋液(5X)
20ml
PA030-3
人ApoE標準品
2-4瓶
PA030-4
人ApoE生物素化抗體
10ml
PA030-5
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PA030-6
洗滌液(20X)
30ml
PA030-7
TMB溶液
10ml
PA030-8
終止液
5ml
PA030-9
封板膜(透明)
2張
PA030-10
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。