產(chǎn)品編號(hào)
PG363
Human Galectin-3/Mac-2 ELISA Kit
96次
2198
的Human Galectin-3/Mac-2 ELISA Kit (Human Galectin-3/Mac-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人半乳糖凝集素3酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的 Galectin-3的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為62pg/ml，與人Galectin-1、Galectin-2、Galectin-4沒(méi)有交叉反應(yīng)，與小鼠Galectin-3有24.8%的交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
半乳糖凝集素3 (Galectin-3)，又稱(chēng)Mac-2，是目前已知半乳糖凝集素家族中唯一一個(gè)屬于one CRD類(lèi)型且具有特殊N端結(jié)構(gòu)的半乳糖凝集素分子。半乳糖凝集素家族都不具有經(jīng)典的信號(hào)肽，但在胞內(nèi)胞外都能檢測(cè)到具有活性的半乳糖凝集素。它們主要參與細(xì)胞粘附、遷移、存活和凋亡過(guò)程，在腫瘤環(huán)境中會(huì)出現(xiàn)一定程度的上調(diào)或下調(diào)。人和小鼠Galectin-3具有86%的氨基酸同源性。人Galectin-3具有250個(gè)氨基酸，分子量為29-36kDa，在巨噬細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、破骨細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞類(lèi)型中都有表達(dá)。與單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞相比，Galectin-3在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)量相對(duì)較高。目前已知，在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白塞氏病和多種腫瘤，特別是當(dāng)發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)，半乳糖凝集素3的水平會(huì)有所升高。
通過(guò)與胞內(nèi)胞外各種結(jié)合蛋白結(jié)合，Galectin-3能夠發(fā)揮多種作用。核內(nèi)Galectin-3能夠改變基因表達(dá)，而在細(xì)胞質(zhì)中，Galectin-3能夠抑制細(xì)胞凋亡，參與細(xì)胞胞吐和內(nèi)吞過(guò)程，同時(shí)還參與巨噬細(xì)胞對(duì)于凋亡細(xì)胞的清除過(guò)程。在細(xì)胞外，Galectin-3能夠與白色念珠菌、肺炎鏈球菌等特殊病原體表面糖類(lèi)物質(zhì)結(jié)合，在先天免疫中發(fā)揮調(diào)理素的作用。還可作為巨噬細(xì)胞趨化因子，并誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的免疫應(yīng)答。Galectin-3與血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合刺激血管生成，與成纖維細(xì)胞結(jié)合則能促進(jìn)纖維化。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人Galectin-3的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人Galectin-3特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人Galectin-3會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人Galectin-3抗體后，生物素化抗人Galectin-3抗體與人Galectin-3結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人Galectin-3濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
PG363-1
人 Galectin-3/Mac-2抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PG363-2
樣品分析緩沖液
5ml
PG363-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PG363-4
人 Galectin-3/Mac-2標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PG363-5
人 Galectin-3/Mac-2生物素化抗體
10ml
PG363-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PG363-7
洗滌液(20X)
30ml
PG363-8
TMB溶液
10ml
PG363-9
終止液
5ml
PG363-10
封板膜(透明)
2張
PG363-11
封板膜(白色)
2張
—
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。