產(chǎn)品編號
PC188
Rat CRP ELISA Kit
96次
3198
的Rat CRP ELISA Kit (Rat C-Reactive Protein Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的CRP的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為112pg/ml，與大鼠Pentraxin 2、Leptin，人CRP，小鼠CRP 等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
C反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein, CRP)，又叫正五聚蛋白1 (Pentraxin?1)，是一種非糖基化蛋白，屬于正五聚蛋白家族，該家族中還包括正五聚蛋白2 (Pentraxin 2/SAP)和正五聚蛋白3 (Pentraxin 3/TSG-14)。CRP的主要功能是作為先天性免疫反應(yīng)的傳感器和活化劑。在人體內(nèi)，CRP是一種主要的急性時相蛋白，其循環(huán)濃度在炎癥初始時會顯著升高。然而在小鼠體內(nèi)，血漿CRP水平在炎癥發(fā)生期間僅出現(xiàn)輕微上升，正五聚蛋白2則具有與CRP在人體內(nèi)相類似的濃度變化。CRP蛋白通過非共價鍵自組裝形成分子量在110-120kDa之間的五聚體，成熟的大鼠CRP與小鼠CRP和人CRP分別具有71%和64%的氨基酸同源性。
CRP能夠與凋亡的細(xì)胞及細(xì)菌結(jié)合并促進(jìn)其被吞噬細(xì)胞吞噬，CRP還能與補(bǔ)體級聯(lián)系統(tǒng)中的一些蛋白如C1q、C4BP和Factor H結(jié)合，增強(qiáng)經(jīng)典補(bǔ)體激活途徑的活化，并增加C3b蛋白的沉積，在之后的應(yīng)答過程中，CRP能夠通過與C4BP和Factor?H結(jié)合抑制補(bǔ)體調(diào)節(jié)細(xì)胞的溶解。這些作用能夠誘導(dǎo)補(bǔ)體抑制蛋白CD46、CD59和CD55/DAF的表達(dá)，抑制膜攻擊復(fù)合物(Membrane?Attack?Complex,?MAC)的合成。
CRP與巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面的Fcγ?RIA和Fcγ?RIIB結(jié)合使得CRP連接的靶細(xì)胞被細(xì)胞吞噬清除，F(xiàn)c受體也是這一過程的必不可少的受體之一。CRP與Fcγ?R?I結(jié)合，誘導(dǎo)Src活化，并抑制炎癥反應(yīng)。另外CRP還能夠促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟，增強(qiáng)體液免疫。但在心血管疾病當(dāng)中，CRP能夠與被氧化的低密度脂蛋白結(jié)合，加劇冠狀動脈梗塞部位的組織損傷，抑制受損血管內(nèi)皮的修復(fù)。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中大鼠CRP的濃度，其原理見圖1。大鼠CRP特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的大鼠CRP會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠CRP抗體后，生物素化抗大鼠CRP抗體與大鼠CRP結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。大鼠CRP濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中大鼠CRP濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PC188-1
大鼠CRP抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PC188-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
PC188-3
大鼠CRP標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PC188-4
大鼠CRP生物素化抗體
10ml
PC188-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PC188-6
洗滌液(20X)
30ml
PC188-7
TMB溶液
10ml
PC188-8
終止液
5ml
PC188-9
封板膜(透明)
2張
PC188-10
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其他組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨(dú)立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。