產品編號
PC179
Mouse/Rat Clusterin ELISA Kit
96次
3198
的Mouse/Rat Clusterin ELISA Kit (Mouse/Rat Clusterin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠/大鼠聚集素酶聯免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠/大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Clusterin的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為0.44ng/ml，與小鼠的Leptin、TGF-β RI/Fc Chimera、TGF-β RII沒有交叉反應，與人的Clusterin有4.9%的交叉反應性，板內、板間變異系數均小于10%。
聚集素(Clusterin)，又稱載脂蛋白J (Apolipoprotein J)、SGP-2、TRPM-2或SP-40，是一種多功能性分泌蛋白。因其能夠誘導細胞聚集所以被稱為聚集素。Clusterin能夠與多種分子結合，并且還能作為胞外錯誤折疊蛋白的分子伴侶。其同樣參與對細胞的增殖、凋亡和癌變過程的調控。Clusterin在多種組織中都有表達，包括成熟的睪丸、卵巢、腎上腺、肝臟、心臟、大腦和胚胎發(fā)育過程時的上皮組織中。小鼠Clusterin以前體蛋白的形式合成，包括兩個螺旋卷曲域、兩個核定位信號區(qū)域(NLS)和一個肝素結合域。經過細胞內剪切后，信號肽被切除，得到分子量相當的α鏈和β鏈，二者通過二硫鍵連接形成分子量為80kDa的異質二聚體被分泌至胞外。成熟的小鼠Clusterin與人Clusterin和大鼠Clusterin分別具有77%和93%的序列相似性。
體內高濃度的Clusterin主要作為高密度脂蛋白的組成之一，通過與LRP-2/Megalin相互作用從而被細胞內化并分解。Clusterin能夠與未被氧化修飾的LDL結合并抵消，因此能夠減少LDL對動脈粥樣硬化患者的損害。Clusterin具有的分子伴侶的功能還可以幫助減少β-淀粉樣蛋白的累積，減緩阿爾茨海默癥患者淀粉樣蛋白斑的形成。在阿爾茨海默癥患者、帕金森患者和多發(fā)性硬化患者的腦脊液以及腎損傷患者或膀胱癌患者尿液中，Clusterin濃度會出現顯著升高。Clusterin循環(huán)水平的升高會通過抑制腫瘤細胞凋亡和促進EMT過程增強腫瘤侵襲性。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中Clusterin的濃度，其原理見圖1。Clusterin特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的Clusterin會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗Clusterin抗體后，生物素化抗Clusterin抗體與Clusterin結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現定量檢測。Clusterin濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產品編號
產品名稱
包裝
PC179-1
Clusterin抗體預包被板
8孔×12條
PC179-2
標準品稀釋液(5X)
60ml
PC179-3
Clusterin標準品
2-4瓶
PC179-4
Clusterin生物素化抗體
10ml
PC179-5
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PC179-6
洗滌液(20X)
30ml
PC179-7
TMB溶液
10ml
PC179-8
終止液
5ml
PC179-9
封板膜(透明)
2張
PC179-10
封板膜(白色)
2張
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說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。